卵巢癌順鉑耐藥相關(guān)基因間長非編碼RNA.pdf

1、卵巢癌是女性常見的惡性腫瘤之一，其死亡率居婦科惡性腫瘤之首。化療原發(fā)和繼發(fā)耐藥是導(dǎo)致卵巢癌患者存活率低的重要因素。順鉑和DNA可以形成鏈內(nèi)和鏈間交聯(lián)，從而引起DNA損傷。研究表明一些基因間長片段非編碼RNA(lincRNAs)廣泛參與了腫瘤細胞DNA損傷應(yīng)答的各個環(huán)節(jié)。因此，lincRNAs可能參與了卵巢癌鉑類耐藥發(fā)生。然而，目前關(guān)于“l(fā)incRNAs如何參與卵巢癌順鉑耐藥的產(chǎn)生”的認識依舊有限。
　　1)本論文通過順鉑間隔刺激法

2、建立了卵巢癌順鉑耐藥細胞株。通過克隆形成率法分析，發(fā)現(xiàn)細胞株A2780-DR對順鉑、紫杉醇和雙氧水的抗性都明顯增強。通過轉(zhuǎn)錄組測序分析卵巢癌順鉑敏感和耐藥細胞株，結(jié)合生物信息學(xué)分析獲得了436個差異表達的lincRNAs。經(jīng)熒光定量PCR驗證，linc-RECK-3，H19，LUCAT1，LINC00961和linc-CARS2-2等在耐藥細胞株中明顯增加，而linc-TNFRSF19-1和LINC00515在耐藥株中明顯降低。H19和

3、LUACT1在癌組織中高表達，且H19高表達的卵巢癌患者容易復(fù)發(fā)。
　　2)H19在敏感細胞株中能被順鉑誘導(dǎo)表達，而在耐藥細胞株中不能被誘導(dǎo)。耐藥細胞株中H19被干擾后，細胞內(nèi)H19的表達量明顯下降，同時細胞對順鉑的敏感性也明顯增加。裸鼠實驗也證實了耐藥細胞中H19被干擾后增加了對順鉑的敏感性。
　　3)采用非標記定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析尋找被H19調(diào)控并參與順鉑耐藥發(fā)生的蛋白。耐藥細胞株與敏感細胞株中差異表達蛋白有113個，其中

4、有27個是NRF2靶蛋白。KEGG分析發(fā)現(xiàn)有6個NRF2靶蛋白參與還原型谷胱甘肽(GSH)代謝。Western-blot實驗發(fā)現(xiàn)有7個蛋白（ALDH1A1，NQO1，GSR，G6PD，GCLC，GCLM和NRF2）均在耐藥細胞中高表達。與耐藥細胞比較，敏感細胞（A2780和A2780-DR/H19si）對雙氧水更敏感，且細胞內(nèi)GSH水平更低。耐藥細胞NRF2干擾或GSH合成酶抑制劑丁硫氨酸亞砜胺(BSO)處理后均增加了對順鉑的敏感性。<