仿刺參生長相關基因的克隆與表達.pdf

1、仿刺參(Apostichopus japonicus)俗稱刺參，屬于棘皮動物門(Echinodermata)，海參綱(Holothuroidea)，循手目(Aspidochirota)，刺參科(Stichopodidae)，仿刺參屬(Apostichopus)。仿刺參是一種非常重要的海洋經濟棘皮動物，近十幾年仿刺參生長的研究取得較大進展，尤其是水溫、鹽度、光照、附著基、養(yǎng)殖密度和餌料等環(huán)境因素對刺參生長影響的相關研究已經較多和深入，在遺

2、傳和發(fā)育生物學方面的研究也有一定進展。但是，關于生長方面的分子遺傳學研究非常少。
　　細胞周期蛋白B(Cyclin B)、卵泡抑素(Follistatin，Fst)和下效應蛋白(Tensilin)基因是參與生長調控的相關基因，在刺參的生長發(fā)育過程中起著重要作用。CyclinB主要通過控制細胞分裂G2/M這個轉換點來調控細胞分裂，是真核細胞周期運轉中起關鍵作用的調控因子。卵泡抑素是一種富含半胱氨酸的糖基化單鏈多肽，是轉化生長因子β超

3、家族成員之一，抑制促卵泡素(FSH)的分泌。下效應蛋白是一種膠原纖維結合蛋白，是由仿刺參真皮的內部的一層異變的膠原組織產生。
　　本實驗以仿刺參為原料，利用分子生物學技術，首次克隆了cyclin B、follistatin、tensilin基因，獲得了3個基因cDNA全序列。通過生物信息學分析發(fā)現，cyclin B基因包含一個717bp的開放閱讀框，編碼一個由238個氨基酸組成的蛋白follistatin基因包含一個1254bp的

4、開放閱讀框，編碼一個由417個氨基酸組成的蛋白，tensilin基因包含一個822bp的開放閱讀框，編碼一個由273個氨基酸組成的蛋白。
　　對這三種基因編碼的蛋白質進行預測分析。Cyclin B包括一個CYCLIN功能結構域，無信號肽無跨膜結構域。Follistatin包括6個功能結構域，按順序分別是FOLN、KAZAL、FOLN、KAZAL、FOLN、KAZAL結構域，有信號肽無跨膜結構域。Tensilin包括一個NTR功能結

5、構域，有信號肽無跨膜結構域。
　　用實時定量PCR(Real-Time qPCR)技術，對cyclin B、follistatin、tensilin基因在大小仿刺參不同組織的表達量分別進行研究。發(fā)現cyclin B基因在大個體仿刺參中的相對表達量要略高于小個體的表達量，體液和肌肉中差異極顯著，在呼吸樹中差異顯著。follistatin基因在小個體仿刺參中各組織相對表達量要略高，在腸中表達量差異顯著，其余差異不顯著。小個體仿刺參體壁