出生前DEHP暴露對大鼠下丘腦神經(jīng)內分泌功能相關基因表達的影響.pdf

1、目的：
　　通過觀察下丘腦神經(jīng)內分泌功能相關基因的表達情況探討出生前 DEHP暴露對大鼠下丘腦神經(jīng)內分泌功能的潛在影響及其可能的機制。
　　方法：
　　本研究采用SD大鼠為研究對象，32只孕鼠隨機分配到4個劑量組內，即溶劑對照組（玉米油）、低劑量組（2mg/kg）、中劑量組（10mg/kg）和高劑量組（50mg/kg）。孕鼠自G14至G19，每天一次灌胃染毒。新生24h內大鼠斷頭處死分離下丘腦組織，液氮冷凍-80℃保存

2、，采用雙洗滌劑緩沖液系統(tǒng)的方法進行RNA提取，選取70日齡左右的成年大鼠，雄性大鼠斷頭處死，雌性大鼠在動情間期斷頭處死，取大腦組織，切成1mm厚的大腦切片，根據(jù)大鼠腦解剖定位圖譜選擇三個與生殖神經(jīng)內分泌相關的三個核團，分別為前腹側室旁核（Anteroventral periventricμlar nucleus，AVPV）和視前內側核（medial preoptic nucleus，MPN）與弓狀核（Arcuate nucleus，AR

3、C），在三個核團區(qū)域采用直徑為1.25mm的打孔針進行打孔取樣，液氮冷凍-80℃保存，采用RNeasy Mini Kit(cat.74104,74106)試劑盒進行提取RNA，逆轉錄采用High Capacity cDNA Reverse Transcription Kits試劑盒，采用自行設計的48基因芯片TaqMan? Array Cards對神經(jīng)內分泌功能相關基因表達水平進行檢測。
　　結果：
　　1、出生前DEHP暴

4、露對新生大鼠下丘腦神經(jīng)內分泌功能相關基因表達的影響：（1）在下丘腦類固醇激素受體和共調節(jié)因子基因中，有 Esr2和 Cyp19a1兩個基因的表達水平受到出生前DEHP暴露影響。對Esr2基因，在雄性2mg/kg和10mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；對Cyp19a1基因，在雄性10mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）。
　　（2）在下丘腦神經(jīng)遞質受體基因中，有Drd1

5、a、Grin2a和Mtnr1a三個基因的表達水平受到出生前DEHP暴露的影響。對于Drd1a基因，在雌性2mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著高于對照組（P＜0.05）；對于Grin2a基因，在雄性10mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；對于Mtnr1a基因，在雄性10mg/kg和50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）。
　?。?）在下丘腦神經(jīng)肽受體基因中有Kis

6、s1r和Tacr3兩個基因的表達水平受到出生前DEHP暴露的影響。對于Kiss1r基因和Tacr3基因在雄性10mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）。
　　（4）在下丘腦神經(jīng)激素受體基因中僅有Avpr1a一個基因的的表達水平受到出生前DEHP暴露的影響。對于Avpr1a基因，在雄性10mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；在雌性50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著

7、高于對照組（P＜0.05）。
　　（5）在下丘腦轉錄調節(jié)因子基因中有Arntl，Clock，Dbp和Per2四個基因的表達水平受到出生前DEHP暴露的影響。對于Arntl基因，在雄性10mg/kg劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；對于 Clock基因，在雄性2mg/kg和10mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；對于Dbp基因，在雄性2mg/kg和10mg/kg DEHP劑量組其表達水平

8、顯著低于對照組（P＜0.05）；對于Per2基因，在雄性10mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）。
　　2、出生前DEHP暴露對成年大鼠神經(jīng)內分泌功能相關基因表達的影響：
　?。?）在AVPV區(qū)域中有Crhr1，Drd2，Mc3r和Tacr3四個基因的表達水平受到出生前DEHP暴露的影響。在成年雄性大鼠中，Crhr1基因在2mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著高于對照組（P＜0.05）；Dr

9、d2基因在2mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著高于對照組（ P＜0.05）；在成年雌性大鼠中， Crhr1基因在10mg/kg和50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；Mc3r基因在2mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；Tacr3基因在2mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著高于對照組（P＜0.05）。
　　（2）在MPN區(qū)域有Avp，Hcrtr2，Avpr1

10、a，Crhr1，Kiss1r，和Tacr3六個基因的表達水平受到出生前 DEHP暴露的影響。在成年雄性大鼠中，Avp基因在10mg/kg和50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；Hcrtr2基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著高于對照組（P＜0.05）；Tacr3基因在10mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；在成年雌性大鼠中，Avpr1a基因在10mg/kg

11、DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；Crhr1基因在10mg/kg和50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；Kiss1r基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；
　　（3）在ARC區(qū)域中有Avp，Esr1，Ghrh，Kiss1，Npy，Pomc和Trh七個基因的表達水平受到出生前 DEHP暴露的影響，且七個基因表達水平改變均集中在雄性大鼠。A

12、vp基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著高于對照組（P＜0.05）；Esr1基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；Ghrh基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；Kiss1基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；Npy基因在10mg/kg和50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）

13、；Pomc基因在2mg/kg，10mg/kg和50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著低于對照組（P＜0.05）；Trh基因在50mg/kg DEHP劑量組其表達水平顯著高于對照組（P＜0.05）；
　　結論：
　　1、出生前DEHP暴露可影響新生大鼠和成年大鼠下丘腦神經(jīng)內分泌功能相關基因的表達，可能會對腦的性別分化和發(fā)育產(chǎn)生影響。
　　2、出生前DEHP暴露對成年大鼠AVPV、MPN和ARC區(qū)域神經(jīng)內分泌功能相關