組織工程神經修復周圍神經缺損過程中血管生成的實驗研究.pdf

1、蘇州大學學位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學位論文是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經注明引用的內容外，本論文不含其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不舍為獲得蘇州大學或其它教育機構的學位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人承擔本聲明的法律責任。論文作者簽名：立：! 立垂 ．日 期：蘭：! ≤．! 呈．壟組織工程神經修復周圍神經缺損過程中血管生成

2、的實驗研究 中文摘要組織工程神經修復周圍神經缺損過程中血管生成的實驗研究中文摘要目的：運用形態(tài)學觀察方法及基因芯片檢測的大數據分析方法，觀察和分析體外構建的組織T 程神經體內修復周圍神經缺損過程中血管生成的自然生物學過程，并研究和探討其血管生成關鍵調控基因和內在分子調控機制。方法：1 ．體外構建組織工程神經。成功制備冷凍干燥的殼聚糖神經導管的基礎上；以大鼠皮膚來源祖細胞( S K P s ) 分化的旋萬細胞( S K P —S C s

3、) 為支持細胞，內置絲素纖維的殼聚糖導管為支架材料，在旋轉灌注式細胞培養(yǎng)系統(tǒng)( R C C S ) 中體外構建組織工程神經。構建好的組織工程神經用生理鹽水( N S ) 漂洗兩次，于N S 中保存?zhèn)溆谩? ．制備坐骨神經缺損模型。S P F 級雌性S D 大鼠隨機分為4 組：T E N G ( 組織工程神經) 組，A u t o g r a f t ( 自體神經) 組，S c a f f o l d ( 殼聚糖神經導管) 組，S h a

4、 m ( 假手術) 組。實驗設1 d 、4 d 、1 w 、2 w 、3 w 、4 w 、8 w 和1 2 w 共8 個時間點。常規(guī)手術制備大鼠坐骨神經1 0 m m 缺損模型。3 ．體視顯微鏡觀察和拍照。動物麻醉后，游離并充分暴露橋接的組織工程神經或白體神經( 每個時間點：T E N G 組n = 3 ，A u t o g r a f t 組n = 3 ) 。組織工程神經或自體神經整體置于體視顯微鏡視野內進行觀察，聚焦其表面血管進行拍

5、照。4 ．H E 染色和拍照。體視顯微鏡拍照完畢后，取出手術側組織工程神經及橋接段自體神經( 每個時間點：T E N G 組n = 3 ，A u t o g r a f t 組n = 3 ) 。動物標本經過固定、切片，進行H E 染色。光鏡下對組織工程神經和自體神經中段的內部血管進行觀察和拍照。5 ．M i c r o ．C T 掃描、血管重建及參數分析。動物麻醉后，進行M I C R O F I L 造影劑灌注( 術后4 w ：T E