選擇性多巴胺D3受體拮抗劑的篩選與評價.pdf

1、目的：多巴胺D3受體(D3R)選擇性分布在藥物依賴相關的腦區(qū)，在藥物精神依賴發(fā)生發(fā)展過程中的作用日益受到了重視，靶向D3R防復吸藥物的研究成為研究的熱點。目前已發(fā)現(xiàn)了80余種選擇性D3R配體，選擇性D3R拮抗劑可能在防復吸方面更具前景。但現(xiàn)有化合物尚存在一些非預期的副作用。軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所七室設計合成了新的靶向D3R化合物，為了發(fā)現(xiàn)新型高選擇性D3R拮抗劑，運用放射性配體受體結合實驗對上述化合物進行了篩選，并評價其對精神依賴

2、的作用。
　　 方法：采用放射性配體受體競爭結合實驗研究7種新化合物對D3R和D2R的親和力及選擇性，初篩具有高選擇性、高親和力的D3R配體。為進一步研究其選擇性，引進或建立了穩(wěn)定或瞬時表達多種G蛋白耦聯(lián)受體(GPCR)的細胞模型32種；采用放射性配體受體競爭結合實驗研究化合物與多種受體的親和力及選擇性。采用[35S]GTPγS結合實驗研究對具有高選擇性、高親和力的一種D3R配體對Gi或Gs耦聯(lián)的GPCR的激動或拮抗活性；采用雙

3、波長激光共聚焦檢測Fluo3-AM熒光標記細胞內游離鈣離子的方法研究化合物對Gq耦聯(lián)的GPCR的激動或拮抗活性。
　　 通過分析化合物靜脈和口服給藥后的大鼠血漿藥時曲線計算化合物的大鼠生物利用度等參數(shù)，并觀察化合物在大鼠肝微粒體中的穩(wěn)定性。
　　 在體藥效學研究，首先觀察化合物單藥單次給予對小鼠自發(fā)活動的影響，在不影響小鼠自發(fā)活動的前提下，選擇合適的藥物劑量，觀察候選化合物對嗎啡誘導小鼠行為敏化表達期的影響并評價候選化合

4、物的抗阿片依賴潛能。
　　 結果：
　　 1、GPCR表達系統(tǒng)的建立：引進和建立了32種GPCR的瞬時及穩(wěn)定的表達體系。
　　 2、化合物對D2R，D3R結合特性的研究：采用放射性配體結合試驗研究發(fā)現(xiàn)，化合物Y-QA31對D3R表現(xiàn)出極高的親和力(Ki=12.1±0.40pmol·L-1)，對D2R的親和力為Ki=32.75±0.35nmol·L-1,Y-QA31對D3R的親和力比D2R高2690倍，優(yōu)于目前與D

5、3R親和力較好的化合物SB-277011A和NGB2904。
　　 3、化合物的受體選擇性研究：Y-QA31與多數(shù)GPCR的親和力很低，ICs0超過10μM，對D3R選擇倍數(shù)超過1000倍；Y-QA31與組胺H1受體(IC50=568.5±0.1nM)，α1A（IC50=86.3±1.2nM）及α,1B（IC50=170.8±3.2nM）腎上腺素受體具有中等親和力，對D3R的選擇倍數(shù)接近100倍；與5-HT1A受體具有較高親和力

6、（IC50=3.5±0.2nM），對D3R的選擇倍數(shù)小于100倍。
　　 4、化合物對多巴胺系統(tǒng)受體的作用性質研究：在[35S]GTPγS結合實驗中，Y-QA31(10-10-10-5M)在穩(wěn)定表達hD3R的細胞模型上沒有激動活性，抑制激動劑喹吡羅（10μM）的激動活性；在穩(wěn)定表達hD2R的細胞模型上，多次實驗觀察到Y-QA31(10-6-10-5M)有約30％的激動，不能排除Y-QA31對D2R的部分激動性質；抑制激動劑喹吡羅

7、（10μM）的激動活性。Y-QA31對D3R、D2R具有阻斷作用。
　　 5、化合物對非多巴胺系統(tǒng)受體作用性質研究：Y-QA31在大鼠海馬組織的膜蛋白上沒有激動活性，抑制5-HT1A選擇性激動劑8-OH-DPAT(10μM)對5-HT1A受體的激動活性，表明Y-QA31對5-HT1A受體具有阻斷作用。Y-QA31拮抗去甲腎上腺素(NA)引起的hα1AR-HEK293細胞內細胞內Ca2+釋放，對α1A受體具有阻斷作用；Y-QA31

8、較弱的抑制α,1B受體和組胺H1受體激動劑的激動效應，具有較弱的阻斷作用。
　　 6、初步藥代動力學研究：Y-QA31的口服生物利用度約為44.48％，在大鼠微粒體中表現(xiàn)穩(wěn)定。
　　 7、化合物的在體藥理作用研究：Y-QA31（3.125-12.5mg·kg-1）不影響小鼠的自發(fā)活動，Y-QA31(6.25-12.5mg·kg-1)劑量依賴性地抑制嗎啡誘導的行為敏化的表達。
　　 結論：Y-QA31為新型高選擇性