泛素化調控Ras超家族GTP酶水平與活性的研究.pdf

1、Ras超家族GTP酶作為分子開關，在細胞內眾多的生理生化調節(jié)過程中起著關鍵作用，包括基因表達、細胞的生長和分化、細胞周期、細胞遷移、膜泡運輸、細胞核與細胞質之間的物質運輸等方面的調控。許多Ras超家族成員與人類多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關系。Ras超家族有大約150個成員，其中部分已經證實會被泛素化修飾，并且這種泛素化修飾對于調節(jié)細胞的生理生化功能起著重要的作用，我們在前期研究中也發(fā)現(xiàn)一些該家族成員可以被泛素化降解。因此，泛素化這一修

2、飾方式作為調控Ras超家族蛋白水平與活性的一種機制，在Ras超家族蛋白所參與調控的各種信號通路中可能有著非常重要而廣泛的意義。但是目前對Ras超家族泛素化調控方面的系統(tǒng)性研究還很少。
　　 本文將人源的Ras超家族成員分別克隆連入帶有Flag標簽的哺乳動物細胞表達載體中，測序鑒定并表達驗證其正確性。至今，已經成功克隆出了91個Ras超家族成員。同時，系統(tǒng)篩選檢測了C2-WW-HECT家族泛素連接酶成員Smurf1、Smurf2、

3、Wwp2、Nedd4和Itch對這些Ras超家族成員的蛋白水平的影響，發(fā)現(xiàn)18個Ras超家族成員的蛋白水平會被C2-WW-HECT家族泛素連接酶的某些成員所調控。
　　 此外，通過進一步深入研究Smurf1對RhoB蛋白水平的調控、蛋白酶體抑制劑對其降解的抑制作用、Smurf1與RhoB在細胞內和體外條件下的相互作用以及體內體外泛素化情況等方面，證實了Smurfl可以直接與RhoB結合泛素化調控RhoB的降解。這這種泛素化調控在