HSP90、SIRT3基因多態(tài)性與肝癌發(fā)病風險及其在肝癌中表達與侵襲間的相關性研究.pdf

1、目的：
　　本課題通過研究HSP90和SIRT3在肝癌細胞中的表達與侵襲以及兩者的多態(tài)性位點與肝癌發(fā)病風險之間的相關性，旨在探討HSP90與SIRT3二者對肝癌發(fā)生發(fā)展的影響，并通過此項群體研究發(fā)現(xiàn)和鑒定新的肝細胞癌易感基因，試圖為肝癌易感人群的疾病預防提供新的標志物，同時也為開發(fā)和研制新的肝細胞癌臨床用藥提供新的靶標，以期對提高肝細胞癌的臨床防治效果提供幫助。
　　方法：
　?。?）選取在2013年1月-2015年1

2、0月期間住院的198例肝癌患者，年齡在35-76歲范圍；同時采集198例體檢中心健康自愿者作為對照，年齡在33-69歲間。所有受試者均基于自愿并簽署知情同意書。對HSP90與SIRT3基因多態(tài)性與肝癌患病風險進行相關性分析，此外還對具有飲酒史患者與肝癌易感性進行相關性分析。（2）將pGCSIL-GFP-HSP90重組慢病毒載體轉染人肝癌AMMC-7721細胞，熒光定量PCR檢測轉染后細胞中HSP90 mRNA的表達；MTT法檢測細胞生長

3、情況；流式細胞術檢測轉染后對各組細胞凋亡的影響；Transwell小室法檢測細胞的侵襲能力；平板克隆形成實驗檢測細胞的增殖能力；細胞劃痕實驗檢測細胞的遷移能力；Caspase-3活性檢測細胞的凋亡情況。
　　（3）采用RNA干擾的方法沉默人肝癌細胞AMMC-7721中HSP90基因的表達獲得HSP90基因沉默細胞株siHSP90-AMMC-7721，分別將野生型WT-HSP90和突變型Mut-HSP90轉染siHSP90-AMMC

4、-7721細胞；熒光定量PCR檢測各組細胞SIRT3 mRNA表達；western blot法檢測各組細胞SIRT3蛋白的表達。
　　結果：
　?。?）HSP90 rs8005905與rs3742429基因多態(tài)性與肝癌的發(fā)生風險之間存在顯著相關性；HSP90 rs3742429與具有飲酒史的人群的肝癌發(fā)生風險呈顯著相關性。
　　（2）上調AMMC-7721細胞中HSP90的表達后使細胞的增殖能力明顯增高；流式細胞儀檢測

5、結果表明，上調細胞中HSP90的表達后對AMMC-7721細胞凋亡情況并未見顯著影響；通過Transwell小室法檢測結果表明上調HSP90的表達后視野平均侵襲細胞數(shù)量顯著增多；平板克隆形成實驗結果表明增高AMMC-7721細胞中HSP90的表達時，細胞克隆的形成能力明顯上升；細胞劃痕實驗檢測表明上調HSP90后AMMC-7721細胞的遷移性明顯增強； caspase-3活性檢測結果表明，上調HSP90表達后AMMC-7721細胞中ca

6、spase-3活性并未受到顯著影響。
　　(3)用熒光定量PCR以及western blot法分別對轉染后各組細胞中SIRT3蛋白的表達情況進行檢測，結果表明野生型HSP90轉染后siHSP90-AMMC-772細胞中SIRT3 mRNA和相應蛋白的表達明顯降低；突變型HSP90轉染后siHSP90-AMMC-7721細胞中SIRT3 mRNA和相應蛋白的表達無明顯變化。
　　結論：
　　HSP90基因多態(tài)性以及患者是