膽堿能通路對急性缺糖缺氧性腎小管細(xì)胞損傷的影響.pdf

1、【目的】
　　探討膽堿能通路對急性缺糖缺氧性腎小管細(xì)胞損傷的影響，為調(diào)控膽堿能通路減輕缺氧性腎損傷提供理論依據(jù)。
　　【方法】
　　取SD大鼠（8W,180-200g，SFP級）脫頸處死，外科方法無菌摘取雙側(cè)腎臟，使用鋼目網(wǎng)提取腎臟巨噬細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞，構(gòu)建雙細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)(Transwell)，使用無糖無血清培養(yǎng)基在三氣培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)巨噬細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞1小時構(gòu)建缺糖缺氧（Oxygenglucosedepriv

2、ation,OGD）模型后按正常培養(yǎng)24小時。將實驗分為空白對照組、OGD組、乙酰膽堿(Ach)+OGD組（OGD前加入100umol/L的Ach處理）、Ach+加蘭它敏（GAL）+OGD組（OGD前加入100umol/L的Ach和10umol/L的GAL處理）四組，取每組共培養(yǎng)細(xì)胞的上清液，使用酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒檢測腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）的濃度。實時熒光

3、定量qRT-PCR檢測巨噬細(xì)胞AchEmRNA相對表達(dá)；Westernblot檢測巨噬細(xì)胞AchE蛋白相對表達(dá)；比色法檢測AChE的活性。采用噻唑藍(lán)(MTT)檢測腎小管上皮細(xì)胞的活力。
　　【結(jié)果】
　　1、正常對照組、OGD組、Ach+OGD組、Ach+GAL+OGD四組炎癥因子濃度分別為：①TNF-α(pg/ml)：（79.60±1.49）VS(140.24±4.81)VS(119.46±4.42)VS（103.31±1

4、.62)（與正常對照組相比實驗組TNF-α均明顯升高P<0.05，實驗組間兩兩比較P<0.05，均有統(tǒng)計學(xué)差異）；②IL-1β(pg/ml)：（99.77±5.95）VS(172.26±13.51)VS（144.34±5.53）VS（119.37±11.42)(與正常對照組相比實驗組IL-1β均明顯升高P<0.05，實驗組間兩兩比較P<0.05，均有統(tǒng)計學(xué)差異）；③IL-10(pg/ml):（90.29±14.37）VS（181.47±

5、16.01）VS（173.62±10.12）VS（188.36±8.73）（與正常對照組相比實驗組IL-10均明顯升高P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)差異）；
　　2、正常對照組、OGD組、Ach+OGD組、Ach+GAL+OGD四組腎小管細(xì)胞活力分別為：（100±0.65％）VS（55.02±6.28%）VS（66.65±6.47%）VS（79.75±4.22%）（四組間兩兩比較均P﹤0.05，有統(tǒng)計學(xué)差異）。
　　3、正常對照組、

6、OGD組、Ach+OGD組、Ach+GAL+OGD四組間比較：①AchEmRNA相對表達(dá)：（1.00±0.08）VS（4.07±0.03）VS（4.22±0.15）VS（3.98±0.29）（與正常對照組相比實驗組AchEmRNA相對表達(dá)均明顯升高P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)差異）；②AchE蛋白相對表達(dá)：(0.31±0.06)VS（0.66±0.07）VS（0.74±0.04）VS（0.67±0.06）（與正常對照組相比實驗組AchE蛋白相

7、對表達(dá)均明顯升高P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)差異）；③AchE活力（KU/L）：(0.69±0.05)VS（0.51±0.02）VS（0.35±0.05）VS（0.32±0.04）（與正常對照組相比實驗組AchE活力均明顯下降P<0.05，實驗組間兩兩比較P<0.05，均有統(tǒng)計學(xué)差異）。
　　【結(jié)論】
　　急性缺氧誘導(dǎo)炎癥因子表達(dá)升高介導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞損傷，Ach、GAL通過減少炎癥因子的分泌減輕腎小管細(xì)胞損傷，Ach、GAL通過