CFTR氯離子通道在上皮細胞創(chuàng)傷修復中的作用研究.pdf

1、上皮組織的創(chuàng)傷愈合是連續(xù)的、復雜的、高度調(diào)節(jié)的過程。創(chuàng)傷發(fā)生后，在創(chuàng)傷處的壞死細胞、組織碎片被清除，由其周圍的健康細胞分裂、增殖、遷移來完成修復過程。人體常見的損傷部位有:皮膚、氣道、胃腸道等。組織損傷時，由于趨化性物質(zhì)和體內(nèi)生長因子的參與，機體可以自我修復。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，囊性纖維化跨膜傳導調(diào)節(jié)因子（cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, CFTR）在創(chuàng)傷愈合中發(fā)揮重

2、要的作用，但其確切分子機制尚不十分清楚。
　　本研究選用Fisher大鼠甲狀腺上皮細胞(FRT)、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染野生型CFTR的FRT細胞(FRT/wt-CFTR)以及轉(zhuǎn)染具有部分氯離子通道活性的F508del突變型CFTR的FRT細胞(FRT/F508del-CFTR)為研究對象，結(jié)合CFTR氯離子通道的選擇性抑制劑GlyH-101，系統(tǒng)研究了CFTR氯離子通道對FRT細胞增殖和遷移速度的影響及相關(guān)機制。由于哮喘過程中也伴隨著氣道上皮

3、的損傷修復，因此，本研究按照文獻所屬的方法建立了氨氣致小鼠氣道上皮損傷模型，為進一步研究CFTR氯離子通道在上皮損傷愈合中的機制奠定了基礎(chǔ)。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1) FRT細胞增殖與CFTR氯離子通道的活性密切相關(guān)，其增殖速度:FRT/wt-CFTR＞FRT/F508del-CFTR＞FRT/CFTR-null;(2) CFTR氯離子通道的選擇性抑制劑GlyH-101對FRT/wt-CFTR細胞的增殖有顯著抑制作用，且上述作用具有時

4、間和劑量依賴性;(3) Hoechst33342染色實驗結(jié)果顯示，CFTR氯離子通道活性抑制能夠引起FRT/wt-CFTR細胞內(nèi)DNA斷裂并產(chǎn)生凋亡小體;(4) Western blotting實驗結(jié)果表明CFTR氯離子通道活性抑制能夠引起FRT/wt-CFTR細胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2下調(diào)，以及Bax、caspase-3、caspase-8和PARP上調(diào);(5) PI染色分析顯示CFTR氯離子通道活性抑制能夠使FRT/wt-CFTR細

5、胞周期阻滯在S期;(6) Western blotting實驗表明CFTR氯離子通道活性抑制引起FRT/wt-CFTR細胞周期相關(guān)蛋白CDK4、CDK6、CyclinD1和Cyclin E下調(diào);(7)CFTR氯離子通道活性與FRT/wt-CFTR細胞的遷移也密切相關(guān)，也具有劑量和時間依賴的特性;(8) Western blotting實驗表明CFTR氯離子通道活性抑制能夠引起FRT/wt-CFTR細胞內(nèi)MMP-2蛋白表達下調(diào);(9)成功

6、在昆明小鼠上建立了氨氣致小鼠氣道上皮損傷模型，為進一步研究CFTR氯離子通道在體內(nèi)損傷修復機制中的作用奠定了基礎(chǔ)。
　　本研究揭示不同CFTR氯離子通道活性的FRT細胞遷移和增殖能力不同。選擇性抑制CFTR氯離子通道能夠通過誘導FRT細胞凋亡和周期的S期停滯來影響增殖，且誘導凋亡可能是通過線粒體凋亡的途徑完成的;選擇性抑制CFTR氯離子通道能夠抑制MMP-2蛋白的表達進而影響遷移。上述結(jié)果揭示CFTR氯離子通道通過影響增殖和遷移，