脂聯(lián)素基因啟動子變異的功能研究.pdf

1、目的:脂聯(lián)素(Adiponectin)是脂肪細胞特異性分泌的一種蛋白。研究表明血清脂聯(lián)素水平與代謝綜合征和腫瘤相關，而脂聯(lián)素基因啟動子變異影響其功能的發(fā)揮。我們前期探討了脂聯(lián)素基因啟動子區(qū)SNP多態(tài)性與云南漢族人群非小細胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer, NSCLC)發(fā)生發(fā)展的相關性，發(fā)現(xiàn)SNP-12140G等位基因有可能是NSCLC的危險因素(OR=1.516;95％ CI:1.098-2.094)。為更深

2、一步地闡明脂聯(lián)素基因結構變異和mRNA的關系，在本研究中，我們將對脂聯(lián)素基因啟動子變異的功能進行初步探討。
　　方法:1.利用聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction，PCR)擴增APM1基因啟動子區(qū);2.將APM1基因啟動子區(qū)連接至螢火蟲螢光素酶報告基因載體pGL4.11上，構建螢火蟲螢光素酶報告基因重組質粒;3.利用多位點基因定點突變試劑盒對重組質粒進行基因突變，獲得包含3個SNP(SNP-12140

3、G＞A，SNP-11426A＞G，SNP-11377C＞G)不同組合的8個單倍體的螢火蟲螢光素酶報告基因重組質粒。4.測序分析重組質粒是否突變成功;5.重組質粒與海腎熒光素酶報告基因pGL4.74共轉染誘導分化第八天的小鼠前脂肪細胞3T3 L1;6.轉染后48h檢測螢火蟲螢光素酶的活性以反映所連接的啟動子變異的作用。
　　結果:成功構建重組質粒，并完成基因定點突變;獲得8中不同SNP組合的單倍體重組質粒;瞬時轉染小鼠前脂肪細胞3T

4、3L1，不同單倍型的重組質粒表達的熒光素酶報告基因活性具有差異;在8種重組質粒中，具有SNP-11377C＞G的C等位基因的單倍型重組質粒的螢火蟲熒光素酶報告基因活性的表達量高于G等位基因的重組質粒;在SNP-11377C＞G等位基因為G的4種重組質粒中，SNP-12140G＞A的A等位基因的重組質粒所表達的螢火蟲熒光素酶報告基因活性高于G等位基因的重組質粒;SNP-11426基因型與熒光素酶活性表達沒有明顯的關系。
　　結論:脂