BDNF基因多態(tài)性在過敏性鼻炎中的研究及上頜竇后鼻孔息肉組織病理學(xué)和炎性發(fā)病機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景
　　過敏性鼻炎(Allergicrhinitis，AR)是在鼻部黏膜接觸過敏原后，由特異性IgE介導(dǎo)的黏膜炎癥反應(yīng)。AR在全世界范圍內(nèi)的發(fā)病率約為10％～40％，不僅嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，也給社會(huì)帶來沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。近年來，AR的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。目前，AR的病因尚不完全清楚，但個(gè)體基因和環(huán)境之間復(fù)雜的相互作用是其發(fā)病的危險(xiǎn)因素之一。在過去的幾十年中，AR基因相關(guān)研究是其病因?qū)W研究的熱點(diǎn)。腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BD

2、NF)是一種分泌蛋白，是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族中的一員。嗜酸性粒細(xì)胞是參與AR免疫反應(yīng)發(fā)生及發(fā)展的重要炎癥細(xì)胞，可生成BDNF蛋白并表達(dá)其相應(yīng)的受體TrkB。BDNF單核苷酸多態(tài)性(SNPs)已被證實(shí)與過敏性哮喘的發(fā)病密切相關(guān)。因此，BDNF可能與AR的發(fā)病密切相關(guān)。但目前，BDNFSNPs是否會(huì)增加中國區(qū)域人群過敏性鼻炎的患病風(fēng)險(xiǎn)，以及BDNF遺傳變異對BDNF基因及蛋白表達(dá)水平的影響尚不清楚。
　　研究方法
　　本研究選取山東

3、地區(qū)有典型過敏癥狀并且過敏原檢測陽性的481例中重度變應(yīng)性鼻炎患者作為實(shí)驗(yàn)組，健康對照組1735例;選取新加坡中國人群中典型過敏癥狀并且過敏原檢測陽性的522例中重度變應(yīng)性鼻炎患者作為實(shí)驗(yàn)組，健康對照組717例;提取受試者外周血DNA。自HapMap中國漢族人群(CHB)中篩選出BDNF標(biāo)簽SNP位點(diǎn)，從每一樣本基因組DNA中取5ng進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增，通過MassARRAY系統(tǒng)檢測標(biāo)簽SNP位點(diǎn)，對受試者進(jìn)行基因分型，評估與AR患病風(fēng)

4、險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)。最后，通過體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)對BNDF遺傳變異所產(chǎn)生的功能效應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。
　　研究結(jié)果
　　在山東人群及新加坡中國人群這兩個(gè)獨(dú)立的群體中，BDNFSNPrs10767664均與中重度變應(yīng)性鼻炎有顯著相關(guān)性(P=0.039，OR=1.17;P=0.0017，OR=1.324)。山東人群中風(fēng)險(xiǎn)等位基因A在AR中的出現(xiàn)率為57％，高于對照組的53％。通過PLINKmeta分析將以上兩個(gè)獨(dú)立群體整合，BDNFSNPrs1076

5、7664仍與中重度變應(yīng)性鼻炎有顯著相關(guān)性(P=0.000298，OR=1.242)。BDNF非同義SNPrs6265與SNPrs10767664連鎖不平衡，遂使用rs6265進(jìn)行體外功能研究。Val/Met重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，與空載體組相比，細(xì)胞裂解液中BDNF蛋白的表達(dá)水平均顯著增高。在體內(nèi)，rs6265CC基因型者外周血BDNF蛋白水平顯著高于CT型及TT型(P=0.02，P=0.03);rs6265CC基因型者，外周血

6、IgE水平顯著高于TT型(P＜0.05)。因此，rs10767664AA基因型者更易表現(xiàn)為中重度過敏性鼻炎，且其血漿中BDNF蛋白及總IgE水平更高。大樣本量數(shù)據(jù)eQTLmeta分析顯示，BDNFSNPs與外周血BDNFmRNA的表達(dá)水平具有顯著相關(guān)性。
　　結(jié)論
　　BDNFSNPs增加了中重度過敏性鼻炎的患病風(fēng)險(xiǎn);BDNFrs10767664AA基因型者外周血BDNFmRNA及蛋白的表達(dá)水平更高;BDNFSNPrs107

7、67664與過敏性鼻炎的發(fā)生密切相關(guān)。
　　第二部分中國人群上頜竇后鼻孔息肉組織病理學(xué)及炎性發(fā)病機(jī)制的研究
　　研究背景
　　上頜竇后鼻孔息肉(AntrochoanalPolyps，ACP)約占全部鼻腔息肉的4％～6％。與臨床上常見的雙側(cè)鼻息肉(bilateralnasalpolyps，BNP)相比，ACP的發(fā)病年齡較低，病變范圍較局限，臨床癥狀相對于BNP也較輕。在過去的幾十年中，對于傳統(tǒng)雙側(cè)鼻息肉發(fā)生的分子機(jī)制的基

8、礎(chǔ)研究眾多，但對ACP病理改變及發(fā)病機(jī)制的研究極少。本研究旨在較大樣本量的中國人群ACP中進(jìn)行較為全面的組織病理學(xué)及炎性發(fā)病機(jī)制的相關(guān)研究，明確ACP的上皮重塑模式，對組織中常見炎癥細(xì)胞的浸潤進(jìn)行檢測，分析上皮重塑及炎細(xì)胞浸潤與ACP臨床特點(diǎn)的關(guān)系，檢測ACP中輔助性T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及其轉(zhuǎn)錄因子和相關(guān)炎性介質(zhì)的表達(dá)，并比較其表達(dá)與對照組鼻腔黏膜的差異。
　　研究方法
　　收集上頜竇后鼻孔息肉ACP33例，傳統(tǒng)雙側(cè)鼻息肉B

9、NP49例，以及行鼻中隔偏曲手術(shù)的下鼻甲黏膜50例作為對照組。通過H＆E及IHC染色，對組織的上皮重塑及嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和FOXP3+T-reg細(xì)胞的浸潤進(jìn)行評估和比較。提取21例ACP及34例對照組的mRNA，通過逆轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)定量PCR，檢測組織中Th1、Th2、Th17和T-reg細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子及相關(guān)炎性介質(zhì)基因水平的表達(dá)。
　　研究結(jié)果
　　與BNP相比，AC

10、P的上皮增生及杯狀細(xì)胞增生程度較輕。在本研究中，87.9％的后鼻孔息肉表現(xiàn)為中性粒細(xì)胞型鼻息肉，其中性粒細(xì)胞的浸潤程度顯著高于BNP及對照組;與對照組相比，ACP中巨噬細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞的浸潤顯著上調(diào)，但肥大細(xì)胞的浸潤是下調(diào)的。在ACP組織中，F(xiàn)OXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的浸潤數(shù)目與中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的浸潤均呈顯著正相關(guān)性;嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤程度與ACP患者的哮喘史具有顯著的正相關(guān)性;巨噬細(xì)胞的浸潤程度與

11、上皮的增生程度及杯狀細(xì)胞的增生程度呈顯著負(fù)相關(guān)性;CD8+T細(xì)胞的浸潤程度與鱗狀上皮化生呈顯著正相關(guān)性。
　　與對照組相比，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞T-reg的相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子FOXP3及炎性介質(zhì)IL10在ACP中的表達(dá)顯著上調(diào)。此外，IL6、中性粒細(xì)胞相關(guān)基因MPO、嗜酸性粒細(xì)胞聚集基因CCL13和CCL18在ACP中的表達(dá)顯著上調(diào)，但Th1/Th2/Th17的轉(zhuǎn)錄因子T-bet，GATA3和RORc的表達(dá)顯著下調(diào)。FOXP3的mRNA表達(dá)水平

12、與T-bet和GATA3呈顯著正相關(guān)性，但與RORc無相關(guān)性;IL6的mRNA表達(dá)水平與T-bet、GATA3和FOXP3呈顯著正相關(guān)性;IL10的mRNA表達(dá)水平與T-bet呈顯著正相關(guān)性;此外，MPO的mRNA表達(dá)水平與CCL18呈顯著正相關(guān)性。IL10的mRNA表達(dá)水平與巨噬細(xì)胞的浸潤數(shù)量呈顯著正相關(guān);MPO的mRNA表達(dá)水平與CD4+T細(xì)胞的浸潤個(gè)數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān)性，與CD8+T細(xì)胞的浸潤數(shù)量顯著負(fù)相關(guān)性;T-bet的mRNA表達(dá)

13、水平與CD8+T細(xì)胞的浸潤個(gè)數(shù)呈顯著正相關(guān)性;RORc的mRNA表達(dá)水平與CD4+T細(xì)胞的浸潤數(shù)量呈顯著負(fù)相關(guān)性。
　　結(jié)論
　　ACP的上皮重塑特點(diǎn)、炎細(xì)胞浸潤和炎癥因子表達(dá)模式與BNP有所不同;ACP中涉及復(fù)雜的炎癥細(xì)胞浸潤，包括顯著上調(diào)的中性粒細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞;IL6、IL10和FOXP3的mRNA的表達(dá)水平顯著上調(diào)，并與其它細(xì)胞因子和炎癥細(xì)胞類型的表達(dá)具有一定的相關(guān)性，可能在ACP的發(fā)病過程中起到一定的