鱷嘴花特征活性組分對(duì)HepA移植瘤小鼠的抗腫瘤機(jī)制與安全性評(píng)價(jià)的研究.pdf

1、惡性腫瘤是世界上發(fā)病率較高的一種疾病，極大地危害人類的健康。現(xiàn)有的抗腫瘤藥物存在著藥效差、特異性差和毒副作用大等問(wèn)題。因此，多途徑篩選低毒、高效、特異的藥食兩用抗腫瘤植物資源仍是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。
　　鱷嘴花（Clinacanthus nutansBurm.f.Lindau）為爵床科鱷嘴花屬植物，又名憂遁草、沙巴蛇草，青箭，廣泛分布在中南半島、馬來(lái)半島以及中國(guó)大陸的廣西、廣東、云南、海南等地區(qū)，藥食兩用，是民間的一種野菜，主要用于預(yù)

2、防和治療惡性腫瘤等。本文以馬來(lái)西亞產(chǎn)野生鱷嘴花為主要研究對(duì)象，通過(guò)分離提純、結(jié)構(gòu)鑒定、體內(nèi)外抗腫瘤活性評(píng)價(jià)和免疫激活調(diào)節(jié)機(jī)制等，較深入系統(tǒng)地研究了其中主要抗腫瘤成分、抑瘤功效機(jī)理和食用安全性等問(wèn)題，為開(kāi)發(fā)天然安全有效的鱷嘴花抗腫瘤食品或食品保健品奠定基礎(chǔ)。
　　本論文主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)論如下：
　?。?）首先以鱷嘴花為原料，采用溶劑法、硅膠柱層析、Sephadex LH-20柱層析及重結(jié)晶等方法進(jìn)行成分分離及純化技術(shù)，并利用H

3、PLC-MS、光譜法（1HNMR、13CNMR、HBQC、COSY）、GC-MS、IR和HPLC等分析技術(shù)，從正丁醇部位中經(jīng)柱層析與30％乙醇洗脫純化后的部分中鑒定出有抗癌活性功能的6個(gè)黃酮碳苷類化合物（葒草苷、異牡荊苷、異葒草苷、牡荊苷、夏佛塔苷和芹菜素）。
　　（2）隨后采用高通量基因芯片表達(dá)譜學(xué)技術(shù)，觀察 CN30治療 HepA移植瘤鼠腫瘤后在基因水平上差異基因的表達(dá)狀況。以對(duì)CN30藥理功能與抗癌機(jī)制進(jìn)行大面積初篩。結(jié)果表

4、明：共有773個(gè)基因被差異表達(dá)，聚類分析也發(fā)現(xiàn)與腫瘤及免疫調(diào)節(jié)有關(guān)的差異基因有近500個(gè)。其中345個(gè)差異基因表達(dá)下調(diào)（P<0.05）；430個(gè)差異基因表達(dá)上調(diào)（P<0.05）。分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與腫瘤，免疫失調(diào)等疾病有關(guān)的基因（靶基因）差異表達(dá)的有504個(gè)；受影響的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要有有絲分裂、Pi3k-Akt、WnT、p53、P450、核因子κB（NFκB）、Janus激酶、轉(zhuǎn)錄活化因子（JAK/STAT）和維甲酸等。
　?。?）緊

5、接應(yīng)用了MTT、免疫印跡分析、免疫熒光組織化學(xué)、胞內(nèi)染色流式分析、酶聯(lián)免疫吸附法、生化指標(biāo)測(cè)定等技術(shù)進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證。確定了鱷嘴花提取物CN30的體內(nèi)抗腫瘤機(jī)制，研究數(shù)據(jù)表明：鱷嘴花CN30中主要的抗腫瘤小分子活性物質(zhì)-黃酮碳苷，具有較強(qiáng)的體內(nèi)抑制移植瘤鼠HepA的增殖作用，可激活CD8+ T細(xì)胞，CTL細(xì)胞，Th1，Th2和Th17細(xì)胞亞群，上調(diào)MHC classⅡ，F(xiàn)oxp3，Casp3，Bax，Bad，CD4+，IL-2和IFN-γ蛋

6、白因子的表達(dá)；下調(diào)Bcl2，Bcl-xl，PI3K和AKT蛋白因子的表達(dá)。Western blot還證實(shí)了鱷嘴花黃酮碳苷能上調(diào)Casp3/Bad和下調(diào)了Bcl2/IL4的表達(dá)。因此可以認(rèn)為通過(guò)NF-κB信號(hào)、細(xì)胞遷移、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡與抗腫瘤細(xì)胞增殖是CN30在體內(nèi)主要的免疫抗腫瘤機(jī)制。
　　（4）最后系統(tǒng)評(píng)價(jià)了鱷嘴花醇提取物的食用安全性。通過(guò)喂食試驗(yàn)鼠不同劑量的鱷嘴花醇提浸膏，觀察其急性毒性、亞慢性毒性和遺傳毒性。結(jié)果顯示，急性