還原型谷胱甘肽對(duì)高糖環(huán)境中人腎小管上皮細(xì)胞的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的:觀察高糖對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2細(xì)胞)產(chǎn)生活性氧和核因子-кB(NF-кB)、骨橋蛋白(OPN)的影響，探討其與糖尿病腎病氧化應(yīng)激機(jī)制的關(guān)系，并應(yīng)用還原型谷胱甘肽進(jìn)行干預(yù)，以探討該藥治療糖尿病腎病的作用及可能的機(jī)制。 方法:四甲基偶氮哇鹽(MTT)比色法觀察不同濃度的還原型谷胱甘肽作用48小時(shí)對(duì)HK-2細(xì)胞增殖的影響，確定合適的還原型谷胱甘肽實(shí)驗(yàn)濃度。將體外培養(yǎng)的人腎小管上皮細(xì)胞分為低糖對(duì)照組(N)、高糖組(H)、高糖

2、+GSH(1mmol/L)組、高糖+GSH(5mmol/L)組及高糖+GSH(10mmol/L)組五組。培養(yǎng)24h、48h及72h后，用分光光度比色法測(cè)定上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，用RT-PCR測(cè)定細(xì)胞內(nèi)NF-кBmRNA的變化，及用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定上清液中OPN的含量。并于培養(yǎng)6h后，用DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)細(xì)胞凋亡。采用單因素方差分析(One-Way ANOVA Test)比較各組數(shù)據(jù)之間的差異。

3、 結(jié)果:1高糖組SOD活力顯著低于正常對(duì)照組(P<0.01)，三組濃度的還原型谷胱甘肽均可增加SOD活力(P<0.05)；高糖組MDA含量明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)，三組濃度的還原型谷胱甘肽均可減少M(fèi)DA含量(P<0.01)，且均呈劑量依賴性。2NF-кBmRNA的表達(dá)與MDA相似，高糖組明顯高于正常組(P<0.01)，并呈時(shí)間依賴性，高糖培養(yǎng)組同時(shí)加入還原型谷胱甘肽，NF-кB的高表達(dá)受到抑制(P<0.05)，且抑制作

4、用隨還原型谷胱甘肽濃度的增加而增強(qiáng)，呈劑量依賴關(guān)系。3在高糖組HK-2細(xì)胞上清液中OPN含量明顯高于正常組(P<0.01)，三組濃度的還原型谷胱甘肽均可減少OPN表達(dá)(P<0.01)。4 SOD與MDA、NF-кB及OPN均存在著負(fù)相關(guān)關(guān)系，MDA、NF-кB及OPN各因子間均存在著正相關(guān)關(guān)系，提示以上因子均參與了高糖對(duì)HK-2細(xì)胞的損傷過(guò)程，可能相互之間具有協(xié)同作用。5高糖可造成腎小管上皮細(xì)胞凋亡，使用還原型谷胱甘肽可明顯抑制高糖所致