健脾益肺方治療ALS動(dòng)物模型hSOD1-G93A轉(zhuǎn)基因小鼠的療效和機(jī)制研究.pdf

1、廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是個(gè)人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)特別加以注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明并致謝。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名』趔日期：多口，f年皓月刁日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學(xué)有關(guān)保留使用學(xué)位論文的規(guī)

2、定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門(mén)機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權(quán)廣州中醫(yī)藥大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)印手段保存和匯編本學(xué)位論文。(保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)論文作者簽毫地淪文導(dǎo)師簽日期：砂k每月／。i虧’ni2生存期死亡時(shí)間：將鼠翻身為仰臥位30s內(nèi)無(wú)法翻回俯臥位即Weydt為0分，登記為死亡。3運(yùn)動(dòng)功能(1)懸尾實(shí)驗(yàn)：懸提鼠尾，觀測(cè)后肢的伸張及其曲

3、腰情況，并予評(píng)分。2分：正常；1分：部分正常；0分：缺失。(2)牽引實(shí)驗(yàn)：將小鼠放于30公分長(zhǎng)的鐵絲上，小鼠5分鐘內(nèi)掉落的次數(shù)(小鼠掉落后，立刻將其放置鐵絲上繼續(xù)實(shí)驗(yàn))。(3)跑臺(tái)實(shí)驗(yàn)：將小鼠放在疲勞轉(zhuǎn)棒儀上，以轉(zhuǎn)速16圈／分鐘連續(xù)5分鐘，登記每組小鼠的平均掉棒次數(shù)(小鼠掉棒后，立即將其放置回疲勞轉(zhuǎn)棒儀上繼續(xù)實(shí)驗(yàn))。(三)健脾益肺組方治療后的病理改變應(yīng)用4％的多聚甲醛經(jīng)心臟灌注，后固定24小時(shí)，蔗糖梯度脫水，用OCT包埋，取脊髓的腰段進(jìn)

4、行冰凍切片(切片厚度20um)，每隔3片取1片。應(yīng)用焦油紫進(jìn)行尼氏染色。前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：具有清晰可辨的尼氏結(jié)構(gòu)，清晰的細(xì)胞核和核仁，胞體較大的多角細(xì)胞。(四)健脾益肺組方治療機(jī)制的探討抗氧化自由基：硫代巴比妥酸法檢測(cè)MDA的含量；亞硝酸鹽法測(cè)定SOD的活性；二硫代二硝基苯甲酸法測(cè)定GSH的含量；二硝基苯甲酸法測(cè)定GSHPx的活性，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。結(jié)果：1體重的變化8周齡模型小鼠開(kāi)始進(jìn)行體重測(cè)定，第812周各組間的體重?zé)o顯

5、著性差異，至第12周開(kāi)始，生理鹽水組模型小鼠體重開(kāi)始減輕，低濃度、中濃度、高濃度健脾益肺方治療組模型小鼠體重仍緩慢增加；第13周開(kāi)始，低濃度、中濃度健脾益肺方治療組模型小鼠體重也開(kāi)始下降，而高濃度組模型小鼠體重仍在緩慢增加；約15周開(kāi)始，高濃度健脾益肺方治療組模型小鼠體重開(kāi)始下降，同生理鹽水組模型小鼠比較，低濃度、中濃度、高濃度健脾益肺方治療組模型小鼠體重下降趨勢(shì)較慢，且呈濃度正相關(guān)性。低濃度健脾益肺方治療組模型小鼠與生理鹽水組模型小鼠

6、比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；中濃度、高濃度健脾益肺方治療組模型小鼠與生理鹽水組模型小鼠比較，差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO01)。2對(duì)發(fā)病時(shí)間和生存期的影響生理鹽水組的模型小鼠在(1015345)天出現(xiàn)臨床癥狀，即Weydt4分法，評(píng)分4分時(shí)(為發(fā)病時(shí)間)，模型小鼠在病程中會(huì)出現(xiàn)后肢無(wú)力，懸尾時(shí)后肢震顫、后伸乏力的表現(xiàn)，至終末期時(shí)雙側(cè)后肢呈牽直樣強(qiáng)直、背部屈曲，終因飲食艱難、呼吸無(wú)力而死亡，平均存活時(shí)間為(1332232)天。低濃度、中