深紅紅螺菌高產氫突變株的篩選及轉座子插入位點分析.pdf

1、能源危機席卷全球，尋找替代能源勢在必行。氫能以其來源豐富、重量輕、貯能高、燃燒產物是水等優(yōu)點成為備受關注的新型能源。光合細菌(photosynthetic bacteria，PSB)是一類能進行光合作用并產生氫氣的細菌，深紅紅螺菌(Rhodospirilum rubrum)屬于兼性厭氧菌，是光合細菌的模式菌株，具有非常重要的研究價值。此外，光合細菌還能分解多種有機物。光能利用，產氫和處理有機廢物、廢水結合于一體的特性，使光合細菌顯示出了

2、巨大的研究價值。轉座子作為遺傳學研究的重要工具，能夠插入基因組中造成插入突變。利用轉座子進行菌株誘變，能夠得到較穩(wěn)定的突變株。并且通過一定的方法，獲得側翼序列，將有利于在分子水平上對產氫機制進行深入的探討。 二氯化鈀(PdCl2)溶液能與氫氣等還原性氣體發(fā)生反應而析出黑色的金屬鈀。本研究據此設計了一種快速篩選高產氫光合細菌突變株的方法。即在96孔深孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)光合細菌并使其產氫，用浸潤PdCl2的脫脂棉片封蓋，以觀察對應孔的棉

3、片顏色變化程度來篩選高產氫的突變株。本研究利用轉座子構建了光合細菌Tn5隨機插入突變庫，并應用此法在其中進行了篩選，對選出的高產氫突變株進行發(fā)酵，用氣相色譜檢測其產氫情況，結果發(fā)現兩種方法得出的結論并不一致，對此情況進行了討論，提出了改進的方法，為快速篩選高產氫菌株方法的建立打下了堅實的基礎。 本研究中，篩選得到一株高產氫菌株R．rubrum RM4。在持續(xù)光照條件下，產氫量是出發(fā)菌株的1.89倍。利用轉座子上攜帶復制起始點的特