凝血酶誘導人肺成纖維細胞表達單核細胞趨化蛋白-1及其信號通路的研究.pdf

1、研究目的:
　　本研究旨在驗證凝血酶是否誘導人肺成纖維細胞(human lung fibroblast-1, HLF-1)表達單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)；并驗證凝血酶是否通過蛋白激酶C（protein kinase C, PKC）途徑誘導人肺成纖維細胞表達MCP-1和凝血酶能否增強NF-κB與MCP-1基因啟動子區(qū)的結合從而提高MCP-1轉錄水平。

2、r>　　方法：
　　培養(yǎng)人肺成纖維細胞，分別用幾種不同類型的蛋白激酶抑制劑預處理人肺成纖維細胞，再用凝血酶（10 nmol/L）刺激，利用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中MCP-1的蛋白表達；提取細胞裂解液中總 RNA并逆轉錄合成cDNA，利用實時定量 PCR檢測 MCP-1 mRNA表達水平；采用用染色質免疫共沉淀（CHIPs）技術檢測在凝血酶的誘導下NF-κB與MCP-1啟動子區(qū)的結合。
　　結果：
　　凝血酶誘導

3、人肺成纖維細胞表達MCP-1；廣譜型PKC抑制劑Bisindolylmaleimide I和RO-31-8220可抑制凝血酶誘導的人肺成纖維細胞MCP-1蛋白釋放及mRNA表達，而Ca2+依賴性PKC抑制劑G?6976則沒有抑制效果；IκK抑制劑可抑制凝血酶誘導的人肺成纖維細胞 MCP-1蛋白釋放及mRNA表達；在凝血酶的誘導下NF-κB與MCP-1啟動子區(qū)的結合加強。
　　結論：
　　實驗結果證實凝血酶可以呈劑量依賴和時間