甘蔗全長丙酮酸磷酸二激酶基因的克隆.pdf

1、C4植物和C3植物相比具有光合速率高、CO2補償點低、幾乎沒有光呼吸等優(yōu)點，特別在強光、高溫、干旱等條件下，C4植物具有明顯的生長優(yōu)勢及水分和營養(yǎng)利用率，生物產(chǎn)量也較高。
　　本實驗的目的是從C4作物甘蔗中克隆全長丙酮酸磷酸二激酶（PPDK）基因，為將其導(dǎo)入C3作物中奠定研究基礎(chǔ)。以甘蔗葉片為材料，提取其基因組DNA為模板，以GenBank上公布的甘蔗PPDK基因cDNA序列設(shè)計引物，進行LA-PCR(Long Acute PCR

2、)擴增。將PCR產(chǎn)物克隆到載體中，轉(zhuǎn)化，測序。最后將全長PPDK基因分兩段分別引入備用的酶切位點，轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，實驗室保存菌種。為檢驗實驗結(jié)果的正確性，以甘蔗葉片提取總RNA為模板，設(shè)計引物，進行RT-PCR擴增，把PCR產(chǎn)物克隆到載體，轉(zhuǎn)化，完成測序。將實驗得到的cDNA測序結(jié)果和公布的序列以及實驗得到的全長測序結(jié)果進行比較。發(fā)現(xiàn)在長約2.9Kb的外顯子區(qū)域上實驗獲得的cDNA序列存在12bp的錯配，GenBank公布的cD