復方血竭制劑對實驗性潰瘍性結腸炎相關結直腸癌的療效及機制初探.pdf

1、隨著潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis，UC)的發(fā)病率逐年上升，潰瘍性結腸炎相關結直腸癌(ulcerative colitis related colorectal cancer,UCRCC)也愈加受到人們關注。研究表明，Wnt/β-catenin信號轉導通路的異常激活在UCRCC發(fā)生及進展中發(fā)揮重要作用。由于傳統(tǒng)結腸癌化療藥物常引起嚴重副作用，患者生存時間和預后并沒有得到明顯改善，所以，尋找更加安全有效的預防和治療結腸

2、癌的藥物已經(jīng)成為目前亟需解決的問題。天然藥物由于具有較高的生物活性和安全性，為腫瘤的治療提供了一個新的視點。
　　通過前期研究，我們發(fā)現(xiàn)復方血竭制劑在UC的治療中具有良好效果，為了進一步觀察該中藥制劑對UCRCC的療效，我們建立了小鼠實驗性UCRCC模型，并觀察不同劑量復方血竭制劑對UCRCC小鼠Wnt/β-catenin信號通路中β-catenin蛋白的分布以及靶基因C-myc、PCNA表達量的影響，探討其可能的抗腫瘤機制。

3、r>　　實驗中，我們將60只5周齡BALB/c小鼠按照隨機原則分為正常對照組、UCRCC模型組、低劑量復方血竭制劑治療組和高劑量復方血竭制劑治療組，每組15只，先適應性喂養(yǎng)1周。正常對照組小鼠持續(xù)用無菌蒸餾水喂養(yǎng)，自實驗開始至實驗結束;模型組及兩治療組小鼠均采用氧化偶氮甲烷(azoxymethane，AOM)/葡聚糖硫酸鈉(dextran sodium sulphate，DSS)方法造模，低、高劑量治療組每天分別予以13ml/kg和26

4、ml/kg等效劑量復方血竭制劑灌胃，自AOM腹腔注射當天開始至實驗結束。在喂養(yǎng)小鼠過程中進行疾病活動指數(shù)(disease activity index，DAI)評分，造模10周后脫頸椎處死所有小鼠，取出回盲部至肛門全部結直腸組織，行大體形態(tài)及組織學形態(tài)觀察，通過免疫組化（immunohistochemistry，IHC）、western-blot、qRT-PCR方法檢測各組小鼠結直腸組織β-catenin蛋白分布以及C-myc、PCNA

5、基因轉錄、總蛋白表達，觀察不同劑量復方血竭制劑對上述指標的影響。
　　結果顯示正常對照組小鼠肉眼及鏡下均未見明顯異常。模型組大體觀察可見廣泛糜爛、潰瘍，均可見息肉狀隆起形成，以末端結腸為主;組織學觀察可見廣泛炎性細胞浸潤及不同程度上皮內(nèi)瘤變，散在癌變表現(xiàn)。治療組肉眼可見黏膜充血、水腫，伴散在糜爛形成，偶見息肉狀隆起;鏡下可見糜爛、壞死，炎性細胞浸潤，散在不同程度上皮內(nèi)瘤變，少數(shù)組織內(nèi)存在癌變。在第1、2、3個循環(huán)周期末，與正常組比

6、較，模型組及治療組DAI評分增高明顯(P＜0.05）;治療組DAI評分均低于模型組(P＜0.05），高、低治療組之間差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。免疫組化結果顯示:β-catenin蛋白在正常組呈細胞膜表達陽性;模型組多數(shù)細胞呈細胞核陽性表達和/或胞漿異位表達，小鼠免疫組化陽性率為92.3％，顯著高于正常對照組(P＜0.05）;高、低劑量治療組細胞核陽性明顯減少，多呈細胞膜/胞漿表達陽性，得分結果以弱陽性及陽性為主，總體陽性率分別為

7、66.7％和80.0％，均顯著低于模型組(P＜0.05），但明顯高于對照組(P＜0.05）。Western-blot結果顯示:模型組及高、低劑量治療組中β-catenin蛋白入核量(分別為1.826±0.192，1.049±0.108，1.063±0.144)較正常對照組(0.127±0.011)明顯增加(P＜0.05），C-myc（0.933±0.105，0.620±0.079，0.615±0.083）和PCNA（0.238±0.02

8、6，0.132±0.016，0.136±0.021）蛋白表達量較各自正常對照組（0.141±0.022，0.065±0.008）也顯著升高(P＜0.05）;與模型組比較，治療組中β-catenin入核明顯減少、C-myc和PCNA蛋白表達量均顯著降低(P＜0.05)，兩治療組之間無顯著差異(P＞0.05）。QRT-PCR結果顯示:各組β-catenin基因mRNA表達量(分別為0.098±0.087，1.071±0.110，1.025±

9、0.082，1.063±0.104)無顯著差異(P＞0.05），模型組及高、低劑量治療組C-myc基因（6.312±0.335，2.735±0.143，2.820±0.179）和PCNA（4.928±0.296，2.453±0.163，2.336±0.171）mRNA表達量較各自正常對照組（0.641±0.122，0.565±0.108）顯著升高(P＜0.05）;與模型組比較，治療組中C-myc和PCNA基因mRNA表達量均顯著降低(P