過敏性眼部瘙癢和外周神經損傷引起的慢性痛相關神經免疫機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分進行論述：
　　第一部分 傷害性感覺神經元FcεRⅠ參與IgE免疫復合物引起的小鼠過敏性眼部瘙癢
　　目的：
　　瘙癢是一種源于皮膚或結膜，使人不適，進而引發(fā)搔抓意愿和搔抓反應的感覺。瘙癢是困擾人類健康的難題，是很多過敏和炎癥相關疾病最常見的臨床癥狀，如過敏性結膜炎、特應性皮炎、接觸性皮炎、蕁麻疹、銀屑病等，嚴重影響患者生活質量及預后。過敏性結膜炎是一類非常常見的過敏性疾病，其發(fā)病率約占總人口的20

2、％。過敏性結膜炎最主要的癥狀是眼部瘙癢。過敏性眼部瘙癢主要為免疫球蛋白E（immunoglobulin E，IgE）介導的Ⅰ型過敏反應釋放組胺等瘙癢介質所致，患者多有過敏病史，發(fā)病時血清或受累組織中總IgE濃度，特別是過敏原特異性IgE濃度往往顯著升高。傳統(tǒng)的抗組胺藥物或肥大細胞穩(wěn)定劑等針對免疫細胞的療法有時并不能取得滿意的療效，提示可能有其他尚未發(fā)現(xiàn)的病理機制。因此研究和闡明過敏性眼部瘙癢的新機制，尋找新的治療手段和藥物靶點具有重要的

3、臨床意義。前期研究發(fā)現(xiàn)FcεRⅠ(Fc-epsilon receptorⅠ)在背根神經節(jié)(dorsal root ganglion，DRG)和三叉神經節(jié)(trigeminal ganglion，TG)的部分神經元上表達。因此我們假設IgE-免疫復合物(IgE-immune complex，IgE-IC)通過FcεRⅠ激活TG外周傷害性感覺神經元，從而參與過敏性眼部瘙癢。本研究的目的是探討在外周傷害性感覺神經元表達的FcεRⅠ參與過敏性瘙

4、癢的發(fā)生機制。
　　方法：
　　1、在小鼠眼部滴加致癢劑和致痛劑用以觀察所引起的小鼠眼部瘙癢和疼痛行為。
　　2、應用雞卵清蛋白(ovalbumin，OVA)作為致敏原與免疫佐劑氫氧化鋁制成混懸液，給予小鼠腹腔注射，從而使小鼠致敏，建立過敏性小鼠模型。在致敏小鼠眼部結膜滴加致敏原OVA，激發(fā)小鼠眼部，引起過敏癥狀，建立小鼠過敏性眼部瘙癢模型。
　　3、應用OVA和小鼠抗OVA IgE型抗體制備IgE-IC。通過鈣

5、成像法驗證IgE-IC對于離體小鼠TG各類神經元興奮性的影響。
　　4、研究IgE Fc受體各亞型在小鼠TG的表達和分布。應用免疫組織熒光、實時定量PCR(quantitative polymerase chain reaction，qPCR)和免疫蛋白印跡(westernblotting)檢測FcεRⅠ和FcεRⅡ在小鼠TG感覺神經元的表達。
　　結果：
　　1、致痛劑在小鼠眼部引起小鼠前爪在眼部明顯的拂掃行為，而致

6、癢劑在小鼠眼部則引起小鼠后爪在眼部明顯的搔抓行為。
　　2、致敏原激發(fā)引起致敏小鼠產生的過敏性眼部瘙癢行為不能被肥大細胞穩(wěn)定劑或組胺受體阻斷劑完全緩解，但可以被FcεRⅠα阻斷性抗體完全緩解。
　　3、FcεRⅠ的α、β、γ三個亞基都在TG神經元細胞上有表達。
　　4、FcεRⅠ在過敏性小鼠TG神經元上表達增加，IgE Fc低親和力受體FcεRⅡ(CD23)在過敏性眼部瘙癢小鼠TG上表達降低。
　　5、IgE-I

7、C通過神經元表達的FcεRⅠα激活離體培養(yǎng)的TG神經元。
　　結論：
　　研究結果表明:
　　(1)小鼠三叉神經節(jié)感覺神經元表達功能性的IgE Fc受體。
　　(2) IgE-IC通過神經元表達的FcεRⅠ激活TG神經元可能直接參與了過敏性限部瘙癢的發(fā)生。
　　(3) TG中FcεRⅠ等表達的失調可能參與小鼠過敏性眼部瘙癢的發(fā)展和調節(jié)。
　　意義：
　　本項研究在小鼠過敏性眼部瘙瘁模型上揭示了一

8、個全新的過敏性瘙癢機制:IgE-IC通過與神經元表達的FcεRⅠ結合直接激活TG傷害性感覺神經元導致過敏性眼部瘙癢的發(fā)生。此機制的闡明為過敏性眼部瘙癢的治療提供了一個全新的思路。
　　第二部分 抑制MyD88依賴性的信號通路減弱外周神經損傷引起的大鼠神經病理性疼痛
　　目的：
　　神經病理性疼痛在普通人群中的發(fā)病率已超5％，是全球重大健康問題之一，其病因機制復雜，尚缺乏有效的治療措施。神經病理性疼痛是由軀體感覺神經系統(tǒng)

9、損傷或疾病造成感覺神經元感覺異常和刺激反應功能改變而引起的慢性疼痛，通常表現(xiàn)為異常疼痛、痛覺過敏、和自發(fā)痛等臨床特征。國際疼痛研究協(xié)會(IASP)定義神經病理性疼痛為由軀體感覺神經系統(tǒng)損傷或疾病引起的疼痛。神經病理性疼痛病程較長，使患者背負嚴重的醫(yī)療負擔，嚴重影響患者的生活質量。越來越多的研究顯示神經免疫在神經病理性疼痛中起著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)固有免疫中的TLRs和多種細胞因子如IL-1β、TNF-α和趨化因子等調控神經病理性疼痛的發(fā)生

10、和發(fā)展過程。Myeloid differentiation factor-88(MyD88)是TLRs和IL-1R的受體適配器，介導TLRs和IL-1R活化引起的下游信號轉導。MyD88依賴的下游信號最終引起多種炎癥因子的表達。TLRs，IL-1R及下游適配器MyD88在痛覺信號系統(tǒng)（DRG和SDH）表達，因此我們假設抑制DRG和DH表達的MyD88適配蛋白減弱外周神經損傷引起的神經病理性疼痛。
　　方法：
　　在大鼠坐骨神

11、經進行結扎建立大鼠慢性坐骨神經縮窄損傷(CCI)神經病理性疼痛模型。應用免疫熒光染色和免疫蛋白印跡檢測DRG和SDH上MyD88、TRIF、IBA1和GFAP的表達。免疫蛋白印跡檢測IL-1β、HMGB1、磷酸化NF-κBp65、NF-κB p65、磷酸化ERK、ERK和TNF-α的表達。鞘內給予MyD88抑制肽MIP后，檢測CCI模型大鼠的疼痛相關行為（熱痛和機械痛）。
　　結果：
　　1、CCI引起大鼠DRG和SDH的M

12、yD88表達上調。
　　2、CCI引起大鼠DRG和SDH的IL-1β和HMGB1表達上調。
　　3、CCI引起大鼠DRG和SDH的NF-κB p65和ERK信號活化。
　　4、鞘內給予MyD88抑制肽MIP緩解CCI引起的神經病理性疼痛。
　　5、鞘內給予MyD88抑制肽MIP降低CCI引起的MyD88高表達水平。
　　6、鞘內給予MyD88抑制肽MIP抑制CCI引起的NF-κB p65和ERK活化。

13、>　　7、鞘內給予MyD88抑制肽MIP抑制CCI引起的SDH膠質細胞活化及TNF-α的表達。
　　8、鞘內給予MyD88抑制肽MIP不影響DRG和DH中TRIF的表達和細胞分布。
　　結論：
　　研究結果表明:
　　MyD88在外周神經損傷引起的大鼠CCI模型中的DH和DRG上表達增加，參與外周神經病理性疼痛的發(fā)生和發(fā)展過程。鞘內給予MyD88抑制肽MIP抑制MyD88適配蛋白的功能可以緩解神經病理性疼痛，且減