回收自體血中腦膜瘤干細(xì)胞檢測(cè)的初步研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)回收腦膜瘤手術(shù)野流失的血液，并進(jìn)行抗凝、濾過(guò)、離心、洗滌及凈化，將得到的紅細(xì)胞懸液進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察和流式細(xì)胞儀檢測(cè)，明確紅細(xì)胞懸液中腦膜瘤干細(xì)胞的含量，評(píng)估自體血回輸技術(shù)的安全性，為其在腦膜瘤手術(shù)治療中的臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　選取2014年06月～2015年12月，于鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院擇期進(jìn)行手術(shù)治療的腦膜瘤患者89例，其中因患者及家屬拒絕使用自體血回輸、合并顱內(nèi)感染或ASA分級(jí)Ⅲ

2、級(jí)以上等原因剔除19例，最終入選腦膜瘤患者70例。自手術(shù)切皮至縫皮實(shí)施血液回收，嚴(yán)格遵照血液回收、清洗、回輸流程進(jìn)行操作。選取分離切除腦膜瘤時(shí)的腫瘤組織出血（B1）、儲(chǔ)血罐內(nèi)收集的血液（B2）、經(jīng)離心及洗滌后的血液（B3）三組標(biāo)本，用推片法將三組血液標(biāo)本分別制成血細(xì)胞單層排列的血涂片，干燥后在光學(xué)顯微鏡下觀察并辨認(rèn)細(xì)胞形態(tài)。制備B1、B2及B3血液標(biāo)本，分別使用流式細(xì)胞術(shù)直接免疫熒光法檢測(cè)其CD133、CDl66的陽(yáng)性表達(dá)情況，并建立二

3、維點(diǎn)圖。術(shù)中取腫瘤組織，固定、石蠟包埋并切片，應(yīng)用蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）進(jìn)行免疫組化染色，在鏡下觀察、診斷腫瘤組織類型，并采集圖像。
　　結(jié)果：
　　70例患者平均年齡52.87±17.29歲，男性37例（52.86％），女性33例（47.14%）。ASAⅡ級(jí)患者22例（31.43%），ASAⅢ級(jí)患者48例（68.57%）。術(shù)中共回收自體血25176ml，每例患者平均

4、回收自體血359.66±169.72ml。在光學(xué)顯微鏡下可見：B1血涂片含有大量的組織碎片、破壞的細(xì)胞基質(zhì)、游離的血紅蛋白等組織，但未觀察到異常形態(tài)的腫瘤細(xì)胞。B2血涂片中組織碎片、破壞的細(xì)胞基質(zhì)、游離的血紅蛋白等組織顯著減少，但含有部分形態(tài)異常的紅細(xì)胞。B3血涂片紅細(xì)胞大小一致，變化均一，鏡下未見其它異常形態(tài)細(xì)胞及組織碎片等。所有患者的病理結(jié)果均為腦膜瘤，腦膜瘤病理分型不同，其鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)亦存在相應(yīng)差異。經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析顯示：B

5、1血標(biāo)本中，CD133的陽(yáng)性表達(dá)率為0.54%，CD166的陽(yáng)性表達(dá)率為3.46%，CD133及CD166均為陽(yáng)性的表達(dá)率為零；B2血標(biāo)本中，CD133的陽(yáng)性表達(dá)率為0.43%，CD166的陽(yáng)性表達(dá)率為3.58%，兩者均為陽(yáng)性的表達(dá)率同樣為零；B3血標(biāo)本中，CD133的陽(yáng)性表達(dá)率為0.39%，CD166的陽(yáng)性表達(dá)率為2.75%，CD133及CD166兩者均為陽(yáng)性的表達(dá)率為零。
　　結(jié)論：
　　經(jīng)自體血回收機(jī)過(guò)濾、離心、分離、