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1、外切葡聚糖酶是纖維素酶的重要組分，是纖維素酶解過程中的限速酶。本實(shí)驗(yàn)篩選獲得一株可以產(chǎn)生外切葡聚糖酶的短小芽孢桿菌AC-4，克隆獲得其外切葡聚糖酶基因(Cbh)，并使其在甲醇畢赤酵母中實(shí)現(xiàn)表達(dá)。主要研究結(jié)果如下: 2、r> (2)經(jīng)PCR擴(kuò)增，獲得了菌株AC-4的外切葡聚糖酶基因片段，其長度為2106bp，編碼701個氨基酸，與菌株Bacillus pumilus SAFR-032的外切葡聚糖酶基因序列相似性為94％。
(1)分離獲得一株細(xì)菌AC-4，外切葡聚糖酶活力為0.625±0.003U/mL，其粗酶液的最適作用pH為9.5，最適作用溫度為50℃。由形態(tài)學(xué)特征和16S rDNA序列分析，可以確定菌株AC-4為短小芽孢桿菌。
(3)將獲得的Cbh基因片段與分泌表達(dá)載體pMETαA連接構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pMETαA-Cbh，從而將基因Cbh成功整合到甲醇畢赤酵母菌株P(guān)MAD16中。SDS-PAGE分析顯示Cbh基因在酵母菌細(xì)胞中成功表達(dá)，分子量約為
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