EphrinB-EphB調控疼痛的信號通路研究.pdf

1、本文主要從以下幾個方面進行論述：
　　第一部分 PKA介導ephrinB-EphB信號相關的脊髓傷害性信息的調制
　　研究目的:
　　研究表明，EphB受體以及它的配體eprinB參與脊髓水平傷害性信息的處理過程。本實驗中，我們探討了蛋白激酶A(protein kinase A，PKA)是否作為其下游的效應分子，進而介導ephrinB-EphB信號相關的脊髓傷害性信息的調制。
　　研究方法:
　　我們使用雄

2、性C57BL/6小鼠來檢測PKA催化亞基(PKAca)的表達、磷酸化的cAMP反應元件結合蛋白（p-cAMP-response element binding protein，p-CREB）、熱痛覺過敏以及機械痛覺異常。PKA的一個抑制劑H89則被用來探討PKA在ephrinB-EphB信號相關的脊髓傷害性信息調制中的作用。
　　研究結果:
　　鞘內注射ephrinB2-Fc能夠引起小鼠熱痛覺過敏以及機械痛覺異常，并且伴隨著

3、脊髓PKAca以及p-CREB的表達增加。預先給予PKA的抑制劑H89阻斷了由于鞘內注射ephrinB2-Fc引起的脊髓CREB蛋白的激活。抑制脊髓的PKA信號能夠阻斷和逆轉小鼠由于鞘內注射ephrinB2-Fc引起的疼痛行為。進一步的研究發(fā)現，通過鞘內注射EphB2-Fc來阻斷EphB受體能夠減輕formalin引起的炎性疼痛、坐骨神經慢性縮窄性損傷（chronic constriction injury，CCI）引起的神經病理性疼痛

4、、以及脛骨骨腔種植腫瘤細胞引（tibia bone cavity tumor cell implantation，TCI）起的骨癌痛的疼痛行為。并且這種疼痛減輕的同時，伴隨著脊髓PKAca以及p-CREB的表達下降。
　　研究結論:
　　這些結果證明了PKA參與ephrinB-EphB信號相關的脊髓傷害性信息的調制的過程。這一結果可能對于探討ephrinB-EphB信號在生理和病理性疼痛中的作用機制具有重要的提示作用。

5、>　　第二部分 EphrinB-EphB信號通過PKCγ調控脊髓疼痛信息處理過程
　　研究目的:
　　脊髓水平ephrinB-EphB信號參與調控疼痛信息的處理過程。本研究深入探討了蛋白激酶C-γ亞型（PKCγ）是否作為一個下游的效應分子，進而介導ephrinB-EphB信號相關的脊髓傷害性信息的調制。
　　研究方法:
　　我們分別使用輻射熱源以及von-Frey細絲來檢測小鼠的熱痛覺過敏以及機械痛覺異常情況。免

6、疫印跡(western blot)分析用來檢測PKCγ的表達。靶向的PKCγ小干擾RNA(small interference RNA，siRNA)用來探討PKCγ是否參與ephrinB-EphB信號相關的脊髓傷害性信息的調制。
　　研究結果:
　　鞘內注射EphB受體的激動劑ephrinB2-Fc能夠引起小鼠熱痛覺過敏以及機械痛覺異常，同時還使脊髓PKCγ的活化增加?；虺聊顾杷降腜KCγ阻斷了由鞘內注射ephrinB

7、2-Fc引起的該疼痛行為。進一步的研究發(fā)現，鞘內注射EphB受體的阻斷劑EphB2-Fc，能夠抑制formalin引起的炎性疼痛、CCI引起的神經病理性疼痛、以及TCI引起的骨癌痛的疼痛行為。除此之外，這些疼痛減輕的同時還伴隨著脊髓PKCγ的表達下降。最后，鞘內注射MK801，一種N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartic acid，NMDA）受體的阻滯劑，能夠顯著的減輕ephrinB2-Fc引起的疼痛行為以及脊髓P

8、KCγ的激活。
　　研究結論:
　　總的來說，這些結果證明了PKCγ在ephrinB-EphB信號相關的脊髓傷害性信息的調制中發(fā)揮重要作用。
　　第三部分 PLCγ1參與EphrinB-EphB信號相關的脊髓疼痛信息的處理
　　研究目的:
　　脊髓水平的ephrinB-EphB信號參與調控疼痛信息的處理過程。本研究探討了磷脂酶C-γ1亞型（PLCγ1）是否作為一個下游的效應分子參與ephrinB-EphB信

9、號相關的脊髓疼痛信息的處理。
　　研究方法:
　　輻射熱源以及von-Frey細絲被分別用來檢測小鼠的熱痛覺過敏以及機械痛覺異常情況。Western blot用來檢測PLCγ1的表達。靶向的PLCγ1小干擾RNA則用來檢測PLCγ1是否參與ephrinB-EphB信號相關的脊髓傷害性信息的處理。
　　研究結果:
　　鞘內注射ephrinB2-Fc（EphB受體的激動劑）能夠引起小鼠熱痛覺過敏以及機械痛覺異常，同時

10、還使脊髓PLCγ1的活化程度增加。基因沉默脊髓水平的PLCγ1阻斷了由鞘內注射ephrinB2-Fc引起的小鼠疼痛行為。我們進一步發(fā)現，鞘內注射EphB2-Fc（EphB受體的阻斷劑）能夠抑制formalin引起的炎性疼痛以及CCI引起的神經病理性疼痛行為，同時，還伴隨著脊髓PLCγ1的活化下降。
　　研究結論:
　　總的來說，這些結果證明了PLCγ1參與了ephrinB-EphB信號相關的脊髓傷害性信息的處理過程。

11、　　第四部分 COX-2參與EphrinB-EphB信號相關的脊髓傷害性信息的調控
　　研究目的:
　　EphB受體以及它的配體eprinB參與脊髓水平傷害性信息的處理過程。本研究中，我們探討了環(huán)氧酶2（cyclo-oxygen-ase-2，COX-2）是否作為其下游的效應分子，進而介導了ephrinB-EphB信號相關的脊髓傷害性信息的調制。
　　研究方法:
　　輻射熱源以及von Frey細絲被分別用來檢測小

12、鼠的熱痛覺過敏以及機械痛覺異常情況。實時定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)用來檢測脊髓COX-2的表達。脊髓COX-2以及胞外信號調節(jié)激酶(extracellularsignal-regulated kinas，ERK）蛋白的表達情況則由western blot來檢測。
　　研究結果:
　　鞘內注射ephrinB2-Fc能夠引起小鼠熱

13、痛覺過敏以及機械痛覺異常，并且伴隨著脊髓COX-2的mRNA以及蛋白的表達增加。抑制脊髓的COX-2信號能夠阻斷和逆轉了由鞘內注射ephrinB2-Fc引起的小鼠疼痛行為。通過鞘內注射EphB2-Fc阻斷EphB受體，能夠減輕完全弗氏佐劑(CFA)引起的炎性疼痛行為，同時脊髓COX-2的mRNA以及蛋白也相應的表達下降。進一步的研究發(fā)現，給予U0126，一種有絲分裂原活化蛋白/胞外信號調節(jié)激酶(mitogen-activated pro