觀察LETM1蛋白在結(jié)腸癌細胞對化療藥物敏感性的影響機制及相關(guān)研究.pdf

1、目的：探討奧沙利鉑耐藥細胞株-HCT116產(chǎn)生的耐藥機制，觀察LETM1蛋白水平變化對其影響。
　　方法：結(jié)腸癌細胞株HCT116和奧沙利鉑耐藥細胞株HCT116-OxR的傳代培養(yǎng)；噻唑藍（MTT）實驗檢測奧沙利鉑對細胞存活和死亡情況，并繪制生長曲線，篩選藥物濃度；利用熒光素酶檢測試劑盒檢測細胞和線粒體內(nèi) ATP的含量；Western-blot法檢測HCT116和HCT116-OxR細胞中LETM1蛋白和糖酵解相關(guān)蛋白的表達變化；

2、葡萄糖和乳酸檢測試劑盒檢測兩種細胞內(nèi)的葡萄糖和乳酸含量；通過線粒體膜電位檢測試劑盒測定線粒體耗氧量兩種細胞的耗氧量的相對值。
　　結(jié)果：比較HCT116-OxR和HCT116細胞株，發(fā)現(xiàn)HCT116-OxR細胞線粒體耗氧量降低、線粒體 ATP含量減少，而胞漿內(nèi) ATP含量相對增加；（2）比較HCT116-OxR和HCT116細胞株，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液葡頭糖含量減少，相反乳酸含量增加；（3）在HCT116-OxR細胞株內(nèi)HIF-1α、Glu

3、-1、HK-2及LETM1蛋白表達水平升高，利用3-BrPA抑制糖酵解，則逆轉(zhuǎn)HCT116-OxR細胞株內(nèi)HIF-1α、Glu-1、HK-2及LETM1蛋白的表；(4)利用3-BrPA抑制糖酵解，增加了HCT116-OxR對奧沙利鉑的敏感性。
　　結(jié)論：1. HCT116-OxR細胞株通過抑制線粒體功能、增加糖酵解途徑產(chǎn)生ATP，導(dǎo)致對奧沙利鉑的耐藥；2.細胞漿內(nèi)ATP含量是結(jié)腸癌細胞引起奧沙利鉑耐藥的關(guān)鍵原因；3.結(jié)腸癌細胞對化