鹽地堿蓬再生體系及遺傳轉化體系的初步建立.pdf

1、山東師范大學碩士學位論文鹽地堿蓬再生體系及遺傳轉化體系的初步建立姓名：趙術珍申請學位級別：碩士專業(yè)：植物學指導教師：王寶山20060520山東師范大學碩士學位論文織的誘導被完全抑制，當達到50mgI。1時，95％的下胚軸褐化死亡。在愈傷組織誘導過程中，Ps(PiperalillinSodium，哌拉西林鈉)濃度為500mgL1時對愈傷組織誘導的影響不顯著。高濃度的Ps(600mgL。)對愈傷組織的誘導有明顯的抑制作用，綜合考慮，在鹽地堿

2、蓬農桿菌介導的遺傳轉化中，誘導愈傷組織的過程宜選用Ps500mgL1來抑制農桿菌的生長，Ran篩選的臨界濃度為30mgL。3以鹽地堿蓬下胚軸作為根癌農桿菌(LBA4404)介導轉化的受體，通過對GUS基因穩(wěn)定表達率的分析，研究該轉化體系的最佳參數。結果表明預培養(yǎng)時間、共培養(yǎng)時間、農桿菌濃度、感染時間和乙酰丁香酮(Acetosyring。ne，AS)的添加方式等對轉化效率都有一定的影響。最佳轉化參數是：切取10天苗齡的無菌苗下胚軸58fi

3、lm，預培養(yǎng)2d后于OD6000j添加100刪AS農桿菌懸浮液中感染5J0min，吸去多余的菌液，將下胚軸轉移到添加100PMAS共培養(yǎng)基中共培養(yǎng)4天，然后轉移到脫菌培養(yǎng)基中進行抑菌培養(yǎng)，3天后將下胚軸轉到篩選培養(yǎng)基上連續(xù)篩選3～4代，每代12天，獲得抗性愈傷組織，轉化頻率為63％。4對轉基因抗性愈傷組織進行G瞧基因組織化學染色和PCR檢測，證實了外源基因己經整合到鹽地堿蓬愈傷組織的基因組中，并得到穩(wěn)定表達。我們正在利用轉基因抗性愈傷組