健步虎潛丸對體外成骨樣細胞功能影響及防治去卵巢大鼠骨質疏松的實驗研究.pdf

1、背景：
　　隨著人口老齡化的進程，骨質疏松癥的發(fā)生率逐年上升，嚴重影響老年人的健康。雖化學藥物制劑療效確切，但是長期使用毒副作用大，且主要以抑制骨吸收為主。應該尋求更加有效而安全的抗骨質疏松藥物。大量研究表明，理想的抗骨質疏松藥物應該是既能夠抑制骨吸收，又能夠促進骨的形成，且副作用少，價格便宜?！敖〔交撏琛背鲎浴秱蒲a要》卷三，其療效已經(jīng)為長期臨床所證實。
　　目的：
　　研究健步虎潛丸對體外成骨樣細胞增殖及功能影響

2、,并進一步研究其對去卵巢大鼠骨質疏松癥的預防作用。本研究擬為開發(fā)新型有效的防治骨質疏松癥藥物奠定基礎,促進防治骨質疏松癥復方中藥的現(xiàn)代化和國際化。
　　材料與方法：
　　1.24只成年雌性SD大鼠隨機分為健步虎潛丸組低劑量組、中劑量組、高劑量組及生理鹽水組，并分別以含生藥1.5g/kg、3g/kg、6g/kg的健步虎潛丸及等體積的生理鹽水灌胃，每天2次，連續(xù)給藥1周。以各組血清分別處理成骨樣細胞24、48、72小時，觀察細胞

3、形態(tài)學，同時對細胞增殖能力進行測定。
　　2.24只成雌性SD大鼠隨機分為健步虎潛丸組低劑量組、中劑量組、高劑量組及生理鹽水組，并分別以含生藥1.5g/kg、3g/kg、6g/kg的健步虎潛丸及等體積的生理鹽水灌胃，每天2次，連續(xù)給藥1周。各組血清分別處理成骨樣細胞24、48、72小時，對堿性磷酸酶染色的細胞進行形態(tài)學觀察，同時對堿性磷酸酶活性進行測定。
　　3.70只成年雌性SD去卵巢大鼠隨機分為健步虎潛丸組低劑量組、中劑

4、量組、高劑量組、生理鹽水組及阿侖磷酸鈉組，并分別以含生藥1.5g/kg、3g/kg、6g/kg的健步虎潛丸、等體積的生理鹽水灌胃、1mg/kg阿侖膦酸鈉灌胃，健步虎潛丸各組及生理鹽水組每天灌胃2次，阿侖磷酸鈉組每天灌胃1次。16周后進行血清酶學、影象學、骨密度、骨顯微形態(tài)計量學、生物力學及組織學的檢測。
　　結果：
　　1．健步虎潛丸含藥血清對ROS17/2.8成骨樣細胞形態(tài)影響：從24小時開始健步虎潛丸低劑量組、健步虎潛丸

5、中劑量組及健步虎潛丸高劑量組的細胞密度高于對照組,核分裂相多見,細胞重疊生長,分泌物多,基質堆積明顯,健步虎潛丸高劑量組細胞改變尤為顯著。
　　2．健步虎潛丸含藥血清對ROS17/2.8成骨樣細胞增殖能力：實驗各組內的MTT值24h、48h、72h逐漸增加，結果具有統(tǒng)計學意義。24h、48h、72h各干預組較對照組MTT值明顯增加，具有有顯著性差異。24h時健步虎潛丸中、高劑量組較低劑量組MTT值明顯增加，具有有顯著性差異；24h

6、時虎潛丸中、高劑量組MTT值沒有顯著性差異。48h、72h時各干預組組間比較，隨干預劑量增加，MTT值增加，結果具有統(tǒng)計學差異。
　　3．ROS17/2.8成骨樣細胞的堿性磷酸酶染色：24h、48h時，各干預組及對照組堿性均磷酸酶染色陽性，但各濃度干預組細胞內的堿性磷酸酶染色肉眼未見明顯差異。72h時，各不同濃度干預組及正常組其ROS17/2.8成骨樣細胞內堿性均為磷酸酶染色陽性,對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組堿性磷酸酶著色

7、逐漸加深。
　　4．健步虎潛丸含藥血清對ROS17/2.8成骨樣細胞堿性磷酸酶活性：隨著時間增加，實驗各組內的MTT值堿性磷酸酶活性值逐漸增加，結果具有統(tǒng)計學意義；24h、48h、72h各干預組較對照組MTT值明顯增加，具有有顯著性差異。24h、48h、72h時各干預組組間比較，隨干預劑量增加，堿性磷酸酶活性值逐漸增加，結果具有統(tǒng)計學差異。
　　5.大鼠血清骨鈣素：與卵巢切除對照組相比，健步虎潛丸各劑量組骨鈣素水平顯著升高，

8、結果具有統(tǒng)計學差異，阿侖膦酸鈉組骨鈣素水平水平顯著降低，結果具有統(tǒng)計學差異。健步虎潛丸各劑量組隨劑量增加，骨鈣素水平有升高的趨勢，但結果無統(tǒng)計學差異。和阿侖膦酸鈉組相比，各劑量組骨鈣素水平顯著升高，結果具有統(tǒng)計學差異。
　　6.酒石酸酸性磷酸酶5b（TRAP-5b）：與卵巢切除對照組相比，各藥物治療組酒石酸酸性磷酸酶5b水平顯著降低，結果具有統(tǒng)計學差異。健步虎潛丸各劑量組隨劑量增加，酒石酸酸性磷酸酶5b有降低的趨勢，但結果無統(tǒng)計學

9、差異。和阿侖膦酸鈉組相比，健步虎潛丸各劑量組的酒石酸酸性磷酸酶5b無統(tǒng)計學差異。
　　7.影象學檢查：對照組其骨皮質薄，邊緣模糊，松質骨的透光度較高，各藥物干預組較對照組相比股骨的骨皮質更厚，松質骨透光度更低。
　　8.骨密度：與卵巢切除對照組相比，各藥物干預組股骨和腰椎骨密度顯著增加，結果具有統(tǒng)計學差異；各藥物干預組組間相比，股骨和腰椎骨密度沒有統(tǒng)計學差異。
　　9.三點彎曲實驗：與卵巢切除對照組相比，各藥物干預組股

10、骨最大負荷顯著增加，結果具有統(tǒng)計學差異；健步虎潛丸各劑量組組間相比，股骨最大負荷無統(tǒng)計學差異；與阿侖膦酸鈉組相比，健步虎潛丸各劑量組股骨最大負荷顯著增加，結果具有統(tǒng)計學差異。與卵巢切除對照組相比，各藥物干預組股骨最大負荷下形變有增高趨勢，但是結果均沒有統(tǒng)計學差異；與阿侖膦酸鈉組相比，健步虎潛丸各劑量組最大負荷有增高趨勢，結果沒有統(tǒng)計學差異。
　　10.腰椎壓縮實驗：與卵巢切除對照組相比，各藥物干預組腰椎最大載荷顯著增加，結果具有統(tǒng)

11、計學差異。健步虎潛丸各劑量組組間相比，腰椎最大載荷無統(tǒng)計學差異。與阿侖膦酸鈉組相比，健步虎潛丸各劑量組腰椎最大載荷顯著增加，結果具有統(tǒng)計學差異。
　　11.骨形態(tài)計量學：與卵巢切除對照組相比，各藥物干預組Tb.Ar、Tb.N顯著增加，Tb.Sp顯著降低，結果具有統(tǒng)計學差異；Tb.Th沒有統(tǒng)計學差異。各藥物干預組組間Tb.Ar、Tb.N、Tb.Sp、Tb.Th沒有統(tǒng)計學差異。
　　12.組織學顯示：腰椎HE、Masson染色及

12、股骨HE、Masson染色顯示各干預組骨小梁排列密集,小梁厚度寬、間距小,骨小梁之間的連接較多；而卵巢切除對照組骨小梁排列稀疏,數(shù)目減少,小梁明顯變細、間距加寬,骨小梁結構出現(xiàn)較大的空白區(qū)域。
　　結論：
　　1.健步虎潛丸含藥血清能促進成骨樣細胞ROS17/2.8的增殖且存在濃度依賴性及時間依耐性。
　　2.健步虎潛丸含藥血清能促進成骨樣細胞的活性且存在濃度依賴性及時間依耐性。
　　3.健步虎潛丸各劑量組均能改

13、善去卵巢大鼠的骨轉換指標，有效促進骨形成，抑制骨吸收。
　　4.健步虎潛丸各劑量組均能有效增加去卵巢大鼠腰椎和股骨BMD。
　　5.健步虎潛丸各劑量組改善去卵巢大鼠的腰椎及股骨的生物力學性能，可降低去勢大鼠骨質疏松骨折風險。
　　6.健步虎潛丸各劑量組均能改善去卵巢大鼠骨骼微觀結構，以提高骨質量。
　　7.健步虎潛丸各劑量組組織學觀察骨小梁排列更密集,小梁厚度更寬、間距更小,骨小梁之間連接增加。
　　8.健