DNA分析在法醫(yī)學種屬鑒定中的應(yīng)用研究.pdf

1、種屬鑒定(species identification)在法醫(yī)學中占有重要的地位，其主要任務(wù)是鑒定法醫(yī)學生物性檢材的種屬來源，確定檢材是否來自人體，必要時還需要確定檢材來自何種動物。種屬鑒定采用的方法主要有三類，即形態(tài)學方法、血清學方法和DNA技術(shù)檢測方法。與蛋白質(zhì)相比，DNA分子相對穩(wěn)定、特異，所以DNA分析方法有助于對微量、降解和腐敗檢材的鑒定。利用DNA分析進行種屬鑒定是目前法醫(yī)學研究的熱點。目的本課題旨在研究17個新的STR基因

2、座和腫瘤抑制基因TP53第八內(nèi)含子的種屬特異性；建立mtDNA細胞色素b(cyt 6)基因PCR-RFLP分析以及復合擴增mtDNA--HV Ⅰ、HVⅡ和cyt b片段進行法醫(yī)學種屬鑒定的方法。研究上述方法在種屬鑒定中的價值和可行性。方法以人和十七種常見動物為研究對象，提取DNA定量后。(1)分別擴增17個STR基因座和TP53第八內(nèi)含子，聚丙烯酰胺凝膠電泳、銀染檢測，分析各基因座和TP53第八內(nèi)含子的種屬特異性。(2)擴增cyt 6基

3、因，根據(jù)擴增產(chǎn)物的有無初步區(qū)分部分動物，對于有擴增產(chǎn)物的動物，選擇限制性內(nèi)切酶(Alu Ⅰ)對擴增產(chǎn)物酶切，分析酶切產(chǎn)物，進行種屬鑒定。(3)復合擴增mtDNA-HV Ⅰ、HV Ⅱ和cyt b片段，PAGE、銀染顯色后分析結(jié)果。結(jié)果(1)D9S1118和D20S604基因座對各動物DNA均無擴增產(chǎn)物；DXS101、DYS391和D20S161基因座只對猴DNA有擴增產(chǎn)物；D2S1774基因座對猴和鼠DNA有擴增產(chǎn)物； D21S1

4、409、DXS6809和DYS393基因座對猴、豚鼠、鼠和蛙DNA有擴增產(chǎn)物，對其他動物DNA無擴增產(chǎn)物或擴增產(chǎn)物在人類等位基因分型區(qū)外；DYS390、DXS6789、DXS9894、DIS2142、DIOS2325、DIS2134、D20S601和D2S2944基因座對多種動物DNA均有擴增產(chǎn)物，片段多位于人類等位基因分型區(qū)內(nèi)。(2)TP53第八內(nèi)含子對人和猴的DNA都擴增出一條長度為460bp的片段；對其他動物雖有擴增產(chǎn)物，但片段長

5、度和人有差異；雞、狗的DNA未見擴增產(chǎn)物。(3)擴增cyt b基因在牛、豬、羊、貓、猴、兔、豚鼠、鼠、鱔及人mtDNA檢出981 bp擴增產(chǎn)物；對狗mtDNA有微弱的非特異性擴增產(chǎn)物；對雞、蛙、鴨、魚和馬mtDNA無擴增產(chǎn)物。經(jīng)Alu I消化后，牛和豬的擴增產(chǎn)物產(chǎn)生三條帶；羊的擴增產(chǎn)物小部分被酶切；貓的擴增產(chǎn)物原981 bp片段被完全酶切，獲得一條約600 bp的片段；猴的擴增產(chǎn)物原981 bp片段被完全酶切，獲得一條約800 bp的片

6、段；兔的原981 bp片段被完全酶切，獲得一條約900 bp的片段；豚鼠原981 bp片段未被完全酶切，但獲得較多小的片段；鼠的原981 bp片段被完全酶切，獲得兩條約400 bp和550 bp的片段；鱔及人的擴增產(chǎn)物無明顯變化。(4)復合擴增mtDNA-HV I、HVⅡ和cyt b片段在人mtDNA表現(xiàn)為278bp、425bp、358bp三條帶，動物為一條帶，在電泳譜中位置與人358bp的條帶存在差異。結(jié)論(1)D9SIll8和D20

7、S604基因座種屬特異性好；DXSIOI、DYS391、D20S161、D2S1774、D21S1409、DXS6809和DYS393基因座對少數(shù)動物有擴增產(chǎn)物，擴增產(chǎn)物多位于人等位基因分型區(qū)外，種屬特異性較好，法醫(yī)學實踐中可用于檢材的種屬來源分析；DXS9894、DYS390、DXS6789、DIS2142、DIOS2325、DIS2134、D20S601和D2S2944基因座種屬特異性差。(2)擴增cyt b基因，根據(jù)擴增產(chǎn)物的有無