新型生物材料團(tuán)聚體[PEAD：肝素：NGF]促外周神經(jīng)損傷的修復(fù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、背景及目的:由交通事故、腫瘤切除術(shù)、先天性畸形、壓迫或挫傷等原因?qū)е碌耐庵苌窠?jīng)損傷(PNI)是一種很棘手的世界醫(yī)學(xué)難題。據(jù)報道，已有2.8％的創(chuàng)傷病人受此影響[1]。這可能會導(dǎo)致運動功能，感覺和自主神經(jīng)功能部分或全部的喪失，因此對愈后病人在運動的自由性及生活質(zhì)量方面將產(chǎn)生顯著的負(fù)面影響。目前已有研究報道神經(jīng)生長因子(NGF)對于此病的治療有著很好的效果。但由于其自生短暫的半衰期及易失活的缺陷，導(dǎo)致其在臨床應(yīng)用受限。因此本研究利用一種新型

2、生物材料PEAD通過靜電相互作用與肝素和NGF發(fā)生結(jié)合，組成[PEAD∶肝素∶NGF]復(fù)合團(tuán)聚體，達(dá)到緩釋NGF的目的并避免NGF在體內(nèi)遭受其他蛋白酶的水解，從而克服NGF自生的不足。另外對[PEAD∶肝素∶NGF]復(fù)合團(tuán)聚體持續(xù)治療坐骨神經(jīng)損傷的優(yōu)勢，可能與緩釋NGF相關(guān)，但連續(xù)釋放的NGF對治療PNI的機(jī)理目前還沒有統(tǒng)一的認(rèn)識，因此，本文的第二個方面主要探究NGF治療PNI的機(jī)理，并證明與自噬密切相關(guān)。
　　方法:1.[PEA

3、D∶肝素∶NGF]團(tuán)聚體治療效果的研究。成年wistar雄性大鼠(200～220g)用10％水合氯醛麻醉后，沿右后肢剪開皮膚，鈍性分離肌肉，暴露坐骨神經(jīng)，距梨狀肌下緣遠(yuǎn)側(cè)約1.5cm處運用二個靜脈夾(間隔1cm)壓迫坐骨神經(jīng)2min，造成坐骨神經(jīng)損傷模型。術(shù)后每組給予對應(yīng)劑量的藥物或生理鹽水并連續(xù)四周，每周采用熱板實驗及腳步印跡法對其右后肢運動功能進(jìn)行行為學(xué)評價。30天后各組灌流并收集損傷的坐骨神經(jīng)區(qū)間，運用投射電鏡，甲苯胺藍(lán)染色HE染

4、色、Western Blot、免疫熒光、以及其他指標(biāo)的檢測手段，觀察各組損傷后恢復(fù)的情況。
　　2.NGF治療PNI的機(jī)理探究。鼠樣和造模方法同1，連續(xù)給藥5天后，灌流各組并收集樣品。運用甲苯胺藍(lán)染色、HE染色、Western Blot、免疫熒光及TUNEL試劑盒檢測各組自噬水平的變化并觀察各組病理結(jié)構(gòu)的改變及細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果:1.[PEAD∶肝素∶NGF]團(tuán)聚體具有一定的包載量，保護(hù)NGF免受胰蛋白酶的降解及緩釋N

5、GF;
　　2.雖然NGF能夠改善損傷后坐骨神經(jīng)功能的恢復(fù)，但NGF團(tuán)聚體在行為功能的恢復(fù)上，比NGF組效果更好;
　　3.NGF團(tuán)聚體能增加腓腸肌濕重及降低其萎縮率，促使新生神經(jīng)纖維的數(shù)目變多及排布規(guī)整，增加髓鞘的厚度及成熟度，效果優(yōu)于NGF;
　　4.NGF能夠上調(diào)S-100β，GAP-43，MAP-2及MBP等結(jié)構(gòu)和功能蛋白的表達(dá)，但其表達(dá)水平不及NGF團(tuán)聚體，且NGF團(tuán)聚體最能夠促進(jìn)軸突和增殖的施旺細(xì)胞(SCs

6、)之間的互助共生關(guān)系，促使新生的神經(jīng)纖維盡快生成;
　　5.在探究NGF的機(jī)理研究中，發(fā)現(xiàn)大鼠坐骨神經(jīng)損傷后的第五天其自噬水平表達(dá)升高，且給予NGF治療后其自噬水平進(jìn)步提高，而且這種自噬水平的升高是表達(dá)在SCs中;
　　6.在模型組升高的自噬水平能促進(jìn)損傷坐骨神經(jīng)內(nèi)髓鞘碎片的清理，給予NGF治療后這種SCs清除髓鞘碎片的能力增強(qiáng);
　　7.NGF能夠減少損傷的SCs和神經(jīng)元的凋亡，并加速新生神經(jīng)纖維生長。
　　結(jié)

7、論:[PEAD∶肝素∶NGF]是一種很好的治療PNI的材料，通過緩釋NGF，能持續(xù)的促進(jìn)坐骨神經(jīng)神經(jīng)內(nèi)結(jié)構(gòu)和功能蛋白的合成和分泌，并增強(qiáng)軸突和髓鞘在再生過程中的互助關(guān)系，從而加速髓鞘和軸突的形成，并增加神經(jīng)纖維的數(shù)目，使損傷坐骨神經(jīng)后的大鼠快速的恢復(fù)運動和感知功能，使其控制運動的腓腸肌變得正常。另外NGF在治療PNI的過程中，正是通過上調(diào)增殖SCs的自噬水平，來加速清除PNI后瓦解的髓鞘碎片，從而讓增殖的SCs快速形成Büngner帶，