玉米尿卟啉原甲基化酶的不同片段表達(dá)、純化及性質(zhì)的初步研究.pdf_第1頁
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1、尿卟啉原甲基化酶(SUMT)催化尿卟啉原Ⅲ在C-2和C-7位甲基化產(chǎn)生前咕啉2,是合成西羅血紅素、維生素B12、血紅素d1和F430因子第一個(gè)分支代謝的酶.該論文中,我們將玉米尿卟啉原甲基化酶基因的不同片斷分別導(dǎo)入含有His-tag的pQE載體,在E.Coli中重組表達(dá),結(jié)果表明,含有成熟酶(L92-W423)和去除成熟酶C端51個(gè)氨基酸(L92-S372)的截尾酶表達(dá)質(zhì)粒的菌斑會(huì)產(chǎn)生紅色熒光,而含去除成熟酶N端36個(gè)氨基酸(G93-W

2、423)的截頭酶菌斑則不顯示紅色熒光,誘導(dǎo)表達(dá)證明去除成熟酶N端36個(gè)氨基酸殘基(SAM結(jié)構(gòu)域)的截頭酶以包涵體形式表達(dá).用親和層析Ni-NTA柱一步純化了成熟酶和去除C端51個(gè)氨基酸殘基截尾酶.SDS/PAGE顯示成熟酶和截尾酶亞基分子量分別約為34KD和33KD,分子篩層析證明成熟全酶分子量約66KD左右,表明該酶是同亞基二聚體.純化的尿卟啉原甲基化酶呈紅色,從酶中分離的色素通過紫外可見光掃描光譜、熒光光譜和質(zhì)譜測(cè)定紅色熒光物質(zhì)主要

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