利用噬菌體12肽庫(kù)篩選生長(zhǎng)抑素的抗原模擬表位.pdf

1、生長(zhǎng)抑素（SS）是由下丘腦分泌的一種含14個(gè)氨基酸殘基的短肽類(lèi)激素，其主要生理作用是抑制生長(zhǎng)激素的分泌。 本研究主要工作及結(jié)果如下： 1．構(gòu)建了pET-32a-ss表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（BE3），用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE檢測(cè)表明，ss基因在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了融合表達(dá)，蛋白分子量約為23.4 KD。 2．用疫苗“激生1號(hào)”免疫日本大耳兔獲得抗生長(zhǎng)抑素血清，飽和硫酸銨粗提IgG，再經(jīng)DE

2、AE-sephadex-A50低壓層析系統(tǒng)純化IgG，最后用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)其純度，并用放射免疫法檢測(cè)SS抗體的含量。以純化后的SS IgG作為篩選配基，用蛋白競(jìng)爭(zhēng)洗脫法結(jié)合陰性血清吸附的方法，對(duì)噬菌體隨機(jī)12肽庫(kù)進(jìn)行了四輪淘洗，隨機(jī)挑取22個(gè)藍(lán)色噬菌斑擴(kuò)增后，用ELISA初步鑒定，發(fā)現(xiàn)有6個(gè)噬菌斑克隆與SS抗體有較強(qiáng)的特異性結(jié)合，通過(guò)進(jìn)一步的競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA，仍有較好的抑制效果。將該6個(gè)陽(yáng)性克隆提取ssDNA進(jìn)行測(cè)序與