DCF1基因表達下調(diào)對神經(jīng)干細胞分化的影響.pdf

1、神經(jīng)干細胞(neural stem cells，NSCs)可自我復制并具有多向分化潛能，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷及退行性疾病的治療中具有重要的應用價值。將神經(jīng)干細胞移植到受損部位，可分化成機體的特定神經(jīng)細胞，完成特定的神經(jīng)功能。然而神經(jīng)干細胞移植存在諸多技術(shù)上的難題，其中移植后神經(jīng)干細胞分化并參與神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)重建的能力成為人們關(guān)注的焦點。闡明神經(jīng)干細胞的分化機制對于解決以上問題有重要理論意義和實用價值。 在神經(jīng)干細胞中，樹突細胞因子(de

2、ntritic cell factor 1,DCF1)基因的功能未見報道。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)DCF1基因在未分化的神經(jīng)干細胞中高表達而在終末分化的神經(jīng)細胞中表達量很低，由此推測此基因可能與神經(jīng)干細胞的分化有關(guān)；隨后克隆并在小鼠神經(jīng)干細胞中過量表達此基因，發(fā)現(xiàn)與對照組相比，過量表達DCF1基因的細胞軸突生長被抑制，DCF1基因可維持神經(jīng)干細胞的狀態(tài)。為了進一步研究DCF1基因在神經(jīng)干細胞分化中的作用，本研究構(gòu)建了RNAi載體，分析DCF

3、1基因被抑制后細胞的分化情況。此外，用轉(zhuǎn)錄因子圈套的方法探索了此基因啟動子區(qū)的功能區(qū)域。本實驗主要進行了以下三部分的研究： 1.研究了以電穿孔法和脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細胞系C17.2的影響因素，獲得了轉(zhuǎn)染的優(yōu)化參數(shù)。結(jié)果顯示，在C17.2細胞中，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于電穿孔法。在24孔板中1.5μgDNA和1μl Lipofectamin2000的組合可得到70％以上轉(zhuǎn)染率。 2.構(gòu)建了四個RNAi載體以及一個序列打亂的對照

4、載體。在轉(zhuǎn)錄后水平上抑制DCF1基因的表達。結(jié)果顯示當DCF1基因抑制后，神經(jīng)干細胞分化神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞，免疫組化證實主要向膠質(zhì)細胞分化，差異顯著(p＜0.01)。首次證實了DCF1基因?qū)ι窠?jīng)干細胞分化的抑制作用，已申請發(fā)明專利，申請?zhí)枺?00610026207.1。 3.用轉(zhuǎn)錄因子圈套的方法，在轉(zhuǎn)錄水平抑制了DCF1基因表達。在基因的啟動子不同區(qū)域設(shè)計了三個高親和力的寡核苷酸(oligodeoxynucleotid，ODNs)