KRT8對乙型肝炎病毒復制影響的體外研究.pdf

1、目的：研究宿主蛋白KRT8對乙型肝炎病毒(HBV)復制的影響。
　　方法：體外培養(yǎng)穩(wěn)定表達HBV的肝癌細胞株(HepG2.2.15細胞)。(1)利用抑制KRT8基因表達的三段特異的siRNA片段轉染HepG2.2.15細胞，實驗分siRNA-1組、siRNA-2組、siRNA-3組、陰性對照組、脂質體對照組和空白對照組，轉染48小時后收集細胞和上清液以檢測細胞內KRT8基因表達水平和上清液中HBV DNA表達水平。(2)利用高表達

2、KRT8基因的質粒轉染HepG2.2.15細胞，實驗分質粒組和對照組，轉染48小時后收集細胞和上清液以檢測細胞內KRT8基因表達水平和上清液中HBV DNA表達水平。(3)利用拉米夫定藥物與HepG2.2.15細胞共培養(yǎng)以抑制細胞HBV復制，實驗分拉米夫定組和對照組，共培養(yǎng)72小時后收集上清液和細胞以檢測上清中HBVDNA表達水平和細胞內KRT8基因表達水平。RT-PCR法檢測KRT8mRNA水平，熒光定量PCR法檢測HBV DNA水平

3、。
　　結果：(1)轉染干擾KRT8基因的siRNA后，siRNA-1組、siRNA-2組、siRNA-3組細胞內KRT8 mRNA表達水平均顯著下調(RQ<0.5)，mRNA表達抑制率分別為90％、89％和80％(p<0.01)，同時，上清液中HBV DNA表達水平也顯著下降，下降率分別為36％、34％、38％(p<0.05)。(2)轉染高表達KRT8基因的質粒后，質粒組KRT8 mRNA表達水平顯著上調(RQ>2)，質粒組KR

4、T8 mRNA水平是對照組的40.32倍(p<0.01)，同時，上清液中HBV DNA表達水平也顯著增加，是對照組的28倍(p<0.01)。(3)拉米夫定藥物與細胞共培養(yǎng)后，拉米夫定組HBV DNA表達水平與對照組相比明顯下降，下降率為66％(p<0.01)，但拉米夫定組KRT8 mRNA表達無顯著改變(RQ=0.758±0.414)，與對照組相比，雖下降了24％，但差異無明顯統(tǒng)計學意義(p>0.05)。
　　結論：抑制宿主KRT