腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子通過(guò)脊髓Akt信號(hào)通路參與大鼠炎性痛.pdf

1、第一部分：鞘內(nèi)注射BDNF小干擾RNA緩解大鼠炎性痛
　　目的:觀察在炎性痛大鼠模型鞘內(nèi)注射BDNF小干擾RNA（siRNA）后對(duì)其痛域的影響。
　　方法:將SPF級(jí)雌性健康Sprague-Dawley（SD）大鼠72只，體重150～180g，隨機(jī)分為6組（n=12）：control組，為模型對(duì)照組；control+BDNFsiRNA組，為模型對(duì)照組+BDNF小干擾 RNA（siRNA）鞘內(nèi)給藥組；CF鞘內(nèi)注射 BDNFA組

2、，為炎性痛組；CFA+mismatch組，為炎性痛組+錯(cuò)配的siRNA鞘內(nèi)給藥組；CFA+jetPEI組，為炎性痛組+轉(zhuǎn)染劑jetPEITM鞘內(nèi)給藥組；CFA+BDNFsiRNA組，為炎性痛組+BDNFsiRNA鞘內(nèi)給藥組。將體外培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞分為3組：溶媒組，陰性對(duì)照組和BDNFsiRNA組，轉(zhuǎn)染后，再使用Real-Time PCR和Westernblot法篩選體外小膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染的BDNFsiRNA。完全弗氏佐劑（CFA）造模后1～3

3、天，分別鞘內(nèi)注射BDNFsiRNA、錯(cuò)配的siRNA及轉(zhuǎn)染劑jetPEITM，siRNA用量2.6μg/10μl，每天1次。分別于造模前及造模后隔日測(cè)定大鼠熱縮足反射潛伏期（PWLT）；并于第一天注藥后連續(xù)測(cè)定24h（1h、2h、3h、4h、5h、6h、12h、24h）。然后，每組各另取4只大鼠，造模后第三天測(cè)痛。
　　結(jié)果: Real-Time PCR結(jié)果顯示BDNFsiRNA組的BDNFmRNA的表達(dá)低于溶媒體組和陰性對(duì)照組；

4、Westernblot結(jié)果顯示BDNFsiRNA組的BDNF表達(dá)低于溶媒體組和陰性對(duì)照組。炎性造模后第1～14天，與control組相比，CFA組、CFA+mismatch組，CFA+jetPEI組的PWLT值顯著降低；而炎性造模后第3天，與CFA組、CFA+mismatch組、CFA+jetPEI組比較，CFA+BDNFsiRNA組PWLT值顯著增高。
　　結(jié)論:在炎性痛大鼠模型鞘內(nèi)注射BDNF小干擾RNA后，大鼠痛域顯著降低<

5、br>　　第二部分：腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子通過(guò)脊髓Akt信號(hào)通路參與大鼠炎性痛
　　目的:觀察鞘內(nèi)注射BDNF小干擾RNA(siRNA)對(duì)脊髓背角BDNF的下游絲氨酸蘇氨酸激酶（Akt）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用及在炎性痛中的可能機(jī)制。
　　方法：將SPF級(jí)雌性健康Sprague-Dawley（SD）大鼠60只，體重150～180g，隨機(jī)分為6組（每組n=12）：control組，為模型對(duì)照組；control+BDNFsiRNA組，為模

6、型對(duì)照組+BDNF小干擾RNA（siRNA）鞘內(nèi)給藥組；CFA組，為炎性痛組；CFA+mismatch組，為炎性痛組+錯(cuò)配的siRNA鞘內(nèi)給藥組；CFA+jetPEI組，為炎性痛組+轉(zhuǎn)染劑jetPEITM鞘內(nèi)給藥組；CFA+BDNFsiRNA組，為炎性痛組+BDNFsiRNA鞘內(nèi)給藥組。將體外培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞分為3組：溶媒組，陰性對(duì)照組和 BDNFsiRNA組，轉(zhuǎn)染后，再使用 Real-Time PCR和Westernblot法篩選體外小

7、膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染的BDNFsiRNA。完全弗氏佐劑（CFA）造模后1～3天，分別鞘內(nèi)注射BDNFsiRNA、錯(cuò)配的siRNA及轉(zhuǎn)染劑jetPEITM，siRNA用量2.6μg/10μl，每天1次。每組取4只大鼠，造模后第三天處死，測(cè)定脊髓后角p-Akt表達(dá)水平（Western Blot）。
　　結(jié)果:大鼠炎性痛造模后第3天，脊髓后角p-Akt的蛋白表達(dá)顯著增加（P<0.01）；control+BDNFsiRNA組脊髓 p-Akt較對(duì)照