Plk1通過與p53的相互作用參與G-,2--M期的轉(zhuǎn)換調(diào)控.pdf

1、在整個周期進程中，細胞順利完成G2/M期的轉(zhuǎn)換是實現(xiàn)細胞增殖的一個關(guān)鍵步驟。由于細胞自身存在G2期DNA損傷檢驗點的監(jiān)控機制，所以可以保證G2/M期轉(zhuǎn)換的順利實現(xiàn)。由于Pololike激酶(Plk1)和p53分別是通過正、負(fù)調(diào)控機制在G2/M轉(zhuǎn)換過程發(fā)揮重要的作用，并且有研究表明Plk1可以參與調(diào)節(jié)p53的活性。因此，本文致力研究Plk1是否可以通過調(diào)節(jié)p53蛋白參與G2/M期轉(zhuǎn)換過程的調(diào)控。 主要結(jié)果如下：1.將同步化在G2期

2、的細胞釋放培養(yǎng)，Plk1的激酶活性上升，說明細胞由G2期順利地向M期過渡。采用低劑量UV照射的方法處理同步化在G2期的細胞，使Plk1的激酶活性受到抑制，并且伴隨著蛋白表達水平的降低，而p53的轉(zhuǎn)錄活性升高、蛋白大量積聚。 2.通過細胞免疫共沉淀實驗證實，在G2/M期Plk1與p53發(fā)生物理性的結(jié)合。酵母雙雜交實驗進一步確證Plk1與p53的DNA結(jié)合區(qū)域發(fā)生直接結(jié)合作用。表明Plk1可能是通過競爭性結(jié)合p53的DNA結(jié)合區(qū)域來

3、抑制p53轉(zhuǎn)錄活性。在細胞內(nèi)過表達Plk1也證明p53的轉(zhuǎn)錄活性受到抑制。 3.細胞內(nèi)過表達Plk1可以抑制p53蛋白的磷酸化；共同過表達Plk1和Mdm2可以加劇Mdm2介導(dǎo)p53的泛素化降解；過表達Plk1還可以促使p53蛋白被轉(zhuǎn)運出細胞核。表明Plk1可以通過抑制p53的磷酸化、促進p53蛋白降解以及抑制p53的入核作用來影響p53的蛋白穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄活性。 4.Plk1和hNRAGE分別作用于p53的不同區(qū)域，Pl

4、k1抑制p53的轉(zhuǎn)錄活性，而hNRAGE上調(diào)p53的轉(zhuǎn)錄活性，當(dāng)兩者共同作用后會相互抵消對p53的作用。hNRAGE對Plk1的激酶活性沒有影響。表明Plk1和hNRAGE可能作為兩個獨立的信號分子參與調(diào)節(jié)p53。 以上結(jié)果表明：在G2期DNA損傷檢驗點的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中，Plk1可以通過與p53的DNA結(jié)合區(qū)域直接結(jié)合，抑制p53的磷酸化，加劇Mdm2介導(dǎo)的p53蛋白降解以及抑制p53入核的方式，抑制性調(diào)節(jié)p53的蛋白穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)