血管內皮細胞向間質細胞轉化在創(chuàng)傷愈合過程中的作用研究.pdf

1、第一部分人病理性瘢痕組織及小鼠創(chuàng)傷愈合過程中存在EnMT
　　 目的:觀察人病理性瘢痕組織中是否存在EnMT;觀察小鼠創(chuàng)傷愈合過程中是否存在EnMT,及其在創(chuàng)傷愈合過程中的表達情況。
　　 方法:臨床收集人病理性瘢痕組織及正常皮膚各10個標本,將標本制成石蠟切片,通過免疫熒光方法檢測FⅧ和α-SMA表達變化。選取雄性4～6周齡昆明系小鼠48只,建立背部正中近頸側皮膚1.5×1.5cm2的全層切創(chuàng)傷模型,分別于傷后3、5、

2、7、9、12和14d隨機處死8只小鼠并切取創(chuàng)面及創(chuàng)沿組織,8只未造模小鼠切取正常皮膚作為對照組,每組標本取4個制成冰凍切片,4個標本采用消化法分離培養(yǎng)血管內皮細胞,應用免疫熒光方法檢測冰凍切片及分離培養(yǎng)的內皮細胞FⅧ和α-SMA表達變化。
　　 結果:免疫熒光檢測結果顯示病理性瘢痕組織及創(chuàng)傷愈合過程中均存在FⅧ、α-SMA雙陽性細胞。創(chuàng)傷愈合過程中,正常對照組皮膚存在少量FⅧ、α-SMA雙陽性細胞。創(chuàng)傷組創(chuàng)后第3、5、7、9d和

3、對照組比較有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01),雙陽性細胞在FⅧ陽性細胞中比例呈單峰趨勢,即在第7d時雙陽性細胞比例達到峰值,創(chuàng)后第12d后基本恢復正常水平(p＞0.05)。
　　 結論:病理性瘢痕組織及創(chuàng)傷愈合過程中均存在EnMT,且在創(chuàng)傷愈合過程中EnMT的表達呈單峰趨勢。
　　 第二部分 TGF-β1對HUVECs的促EnMT作用研究
　　 目的:觀察不同濃度TGF-β1對內皮細胞的促EnMT作用影響,探討En

4、MT在病理性瘢痕形成和創(chuàng)傷愈合過程中的作用機制。
　　 方法:分離培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞,采用不同濃度的TGF-β1(10、25、和50 ng/ml)刺激細胞72h后,倒置顯微鏡觀察誘導后細胞形態(tài)變化,免疫熒光方法檢測FⅧ和α-SMA表達變化,RT-PCR檢測VE-鈣粘蛋白(VE-Cadherin),α-SMA和Ⅰ型膠原基因表達變化。
　　 結果:正常對照組內皮細胞呈鋪路石樣生長,TGF-β1刺激組內皮細胞由鋪路石樣形態(tài)向

5、梭形轉化。免疫熒光檢測可見對照組含有少量FⅧ,α-SMA的雙陽性細胞。TGF-β1組α-SMA,FⅧ雙陽性細胞明顯增多,并且具有明顯的濃度依賴性(P＜0.05,P＜0.01)。RT-PCR檢測結果顯示,TGF-β1刺激導致內皮細胞特異性標記物VE-鈣粘蛋白(VE-cadherin)基因的表達顯著減少(P＜0.05),隨著TGF-β1刺激濃度的增加,VE-鈣粘蛋白基因表達呈明顯的下降趨勢;相反,內皮細胞間質性標記物α-SMA和Ⅰ型膠原基因