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文檔簡介
1、目的:頸椎后縱韌帶骨化癥(ossification of the posterior longitudinal ligament,OPLL)是常見的脊柱疾病,尤其是在亞洲人群中發(fā)生較為多見,對患者健康有嚴(yán)重危害。本人所在課題組之前的研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)力加載對OPLL的發(fā)生及發(fā)展起重要影響,并建立了體外機(jī)械牽張拉力誘導(dǎo)的頸椎后縱韌帶成纖維細(xì)胞(FC)的成骨分化模型。雖然前期研究對力學(xué)因素導(dǎo)致的后縱韌帶骨化有了一定的詮釋,但是仍未能解釋清楚其確切的
2、機(jī)制,需要進(jìn)一步探索。長鏈非編碼RNA(long-noncoding RNA,lncRNA)是指長度大于200nt的、非編碼的RNA,能夠參與并調(diào)控基因的表達(dá),目前尚未有報道lncRNA在后縱韌帶骨化病發(fā)生過程中的作用以及機(jī)制。因此本項研究將探討lncRNA在應(yīng)力加載所導(dǎo)致的后縱韌帶骨化進(jìn)程中的作用及機(jī)制。
方法:提取頸椎后縱韌帶組織總RNA,利用lncRNA芯片檢測骨化組織以及非骨化組織中l(wèi)ncRNA的表達(dá)差異。利用實時熒光
3、定量PCR進(jìn)行驗證。分離并培養(yǎng)頸椎后縱韌帶成纖維細(xì)胞,加載機(jī)械牽張拉力后檢測lncRNA的表達(dá)變化。利用starbase軟件分析lncRNA相結(jié)合的miRNA,然后利用Targetscan軟件分析miRNA的靶基因。通過siRNA調(diào)控韌帶成纖維細(xì)胞中l(wèi)ncRNA的表達(dá),并檢測相關(guān)miRNA以及靶基因的表達(dá),調(diào)控韌帶成纖維細(xì)胞中miRNA的表達(dá)并構(gòu)建miRNA熒光素酶報告載體驗證miRNA的靶基因。
結(jié)果: lncRNA芯片檢測
4、結(jié)果表明頸椎PLL骨化及非骨化組織中l(wèi)ncRNA差異性表達(dá)。lncRNA MALAT1和NEAT1在頸椎PLL骨化組織中的表達(dá)顯著性高于非骨化組織。機(jī)械應(yīng)力可以顯著提高lncRNA MALAT1和NEAT1在頸椎后縱韌帶FC中的表達(dá)。利用starbase軟件分析發(fā)現(xiàn)lncRNA MALAT1可以和miR-30a-5p結(jié)合。利用Targetscan軟件分析miR-30a-5p存在靶基因RUNX2。機(jī)械牽張拉力促進(jìn)韌帶成纖維細(xì)胞中l(wèi)ncRN
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