高糖影響大鼠心肌細胞內(nèi)脂素表達的機制.pdf

1、目的：內(nèi)脂素(visfatin)是在2005年被確定的脂肪因子，它在動物的進化過程中保持高度的不變。已經(jīng)證實內(nèi)脂素為胰島素的類似物，它能降低血漿葡萄糖的濃度，增加細胞因子的產(chǎn)生以及誘導血管的生成，其發(fā)揮作用可能與脂肪因子的致炎等做用相關[1]。
　　糖尿病(diabetes mellitus，DM)心肌病是糖尿病患者重要的并發(fā)癥之一，與糖尿病患者的高心力衰竭發(fā)生率和高死亡率密切相關。內(nèi)脂素的促增殖、促炎等作用可能在糖尿病心肌病的病

2、理過程中發(fā)揮一定的作用。內(nèi)脂素在心血管系統(tǒng)中的作用研究很多，但迄今尚無高糖對心臟細胞表達、合成內(nèi)脂素影響的研究。本實驗的前期部分表明內(nèi)脂素的分泌同高糖存在濃度-時間依賴性，但介導高糖影響內(nèi)脂素分泌的細胞通路一直不明。
　　大量研究表明在糖尿病腎病的過程中，MAPK通路在高糖的作用下激活并活化多種核轉錄因子，導致目的基因的表達增加，但MAPK通路在糖尿病心肌病中的作用尚無深入的研究。本實驗擬探討不同的MAPK通路在高糖刺激內(nèi)脂素分泌

3、中的作用機制，為臨床治療糖尿病，降低糖尿病的心肌損害，提供重要的理論依據(jù)和指導。
　　前期試驗已經(jīng)證明了SD大鼠心肌細胞表達內(nèi)脂素，顯示在一定時間范圍內(nèi)，高糖刺激大鼠心肌細胞內(nèi)脂素的表達呈濃度-時間依賴性。將心肌細胞暴露于5.5mmol/L，10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L培養(yǎng)48h，結果暴露于50mmol/L的心肌細胞內(nèi)脂素表達的趨勢高于細胞暴露于30mmol/L的，但沒有達到統(tǒng)計學意義。使用30mmol/l

4、的血糖對心肌細胞進行處理，分別于6h，12h，24h，48h進行檢測，結果顯示心肌內(nèi)脂素的表達在24h達峰。
　　方法：無菌試驗條件下提取新生2-3天的Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌細胞進行原代培養(yǎng)，48h的含血清培養(yǎng)，24h后撤血清培養(yǎng)，選取形態(tài)及生長狀態(tài)良好的心肌細胞隨機分為5組：(1)低糖對照組(5.5mmol/L)、(2)高糖30mmol/L組、(3)高糖30mmol/L+ERK1/2抑制劑(PD980591

5、0μmol/L)組、(4)高糖30mmol/L+JNK抑制劑(SP60012510μmol/L)組、(5)高糖30mmol/L+p38MAPK抑制劑(SB20358010μmol/L)組。該研究分別將以下抑制劑：SP600125(JNK通路抑制劑)、SB203580(p38通路抑制劑)和PD98059(ERK1/2抑制劑)提前30min加入心肌細胞培養(yǎng)液中進行預處理，然后與高糖(30mmol/1)共同培養(yǎng)24小時。應用RT-PCR技術檢

6、測內(nèi)脂素mRNA的表達水平，應用Elisa技術檢測培養(yǎng)液中內(nèi)脂素蛋白的含量。
　　結果：高糖條件下，心肌細胞經(jīng)預處理，結果顯示：高糖+SB203580組和低糖濃度組對比心肌細胞內(nèi)脂素mRNA和細胞培養(yǎng)液內(nèi)脂素蛋白表達有明顯的區(qū)別，但與高糖組相比較有明顯的降低；高糖+SP600125組及高糖+PD98059組分別較低糖濃度組有明顯的區(qū)別，但與高糖組相比較無明顯差異。
　　結論：p38 MAPK是細胞在高糖誘導的心肌細胞內(nèi)脂素表