巨噬細胞微粒通過激活MAPK信號通路誘導THP-1細胞產生IL-8.pdf

1、目的：巨噬細胞微粒是介導慢阻肺、糖尿病、慢性腎病等病發(fā)病的重要病因。目前研究已得知，巨噬細胞微粒引起的過度炎癥反應導致的免疫損傷是其致病的主要原因，但是巨噬細胞微粒引起過度炎癥反應的具體發(fā)病機制尚不明確。本實驗研究旨在探討巨噬細胞微粒能否誘導人單核細胞(THP-1)產生炎癥因子IL-8，以及絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路在巨噬細胞微粒誘導 THP-1細胞產生炎癥因子IL-8的過程中的作用，進一步探討巨噬細胞微粒的致病原理。

2、>　　方法：參照Nakamura和Yang SR的方法，用注射器連續(xù)抽吸收集2支完全燃燒的香煙的煙霧，隨后將煙霧慢慢注射到不含血清的20ml培養(yǎng)基中，得到濃度為10％的香煙煙霧提取物（cigarette smoke extract，CSE）溶液。THP-1細胞用含佛波酯（PMA）的培養(yǎng)基處理24h后再用含2.5%的CSE的培養(yǎng)基刺激20h，隨后收集微粒并作流式細胞術檢測。分別用103、104、105、106/ml的巨噬細胞微粒處理已被用

3、含佛波酯（PMA）的培養(yǎng)基刺激24h的THP-1細胞，分別在0h、3h、6h、12h、24h停止刺激。收集細胞后ELISA方法檢測 IL-8。105/ml的巨噬細胞微粒處理已被用含PMA的培養(yǎng)基刺激24h的THP-1細胞，分別在0min，15min，30min，60min停止刺激。Western blotting方法分別檢測ERK1/2、JNK、p38的磷酸化程度。分別用1 μM、10μM、30μM的p38特異性抑制劑SB20

4、3580、JNK特異性抑制劑SP600125、ERK1/2特異性抑制劑 PD98059預處理已被PMA刺激的THP-1細胞，30min后再用105/ml巨噬細胞微粒刺激THP-1細胞12h，并用ELISA方法分析不同抑制劑對 IL-8產生的影響。
　　結果：
　　(1)用含2.5%的CSE的培養(yǎng)基培養(yǎng)經 PMA處理的THP-1細胞20h后，能明顯誘導THP-1細胞產生巨噬細胞微粒。
　　(2) ELISA結果表明，不同

5、濃度組的巨噬細胞微粒都能明顯刺激THP-1細胞產生IL-8。細胞上清中IL-8含量隨微粒處理濃度的增加表現為逐漸升高的趨勢，當微粒濃度為105/ml時達到最高。在同一濃度組間，隨著處理時間的遞增，IL-8的含量逐漸升高，在12h時IL-8產生最多，隨后下降。
　　(3) WB圖片表明，巨噬細胞微粒處理THP-1細胞后p38/MAPK、JNK和ERK1/2/MAPK的磷酸化水平都較對照組升高，并且隨著巨噬細胞微粒處理時間的遞增p38

6、/MAPK、JNK和ERK1/2/MAPK的磷酸化水平逐漸升高，三條通路的磷酸化程度基本都在處理THP-1細胞30min后升為最高。
　　(4) ELISA檢測結果表明：分別用1μM、10μM、30μM的p38特異性抑制劑SB203580、JNK特異性抑制劑SP600125、ERK1/2特異性抑制劑 PD98059預處理 THP-1細胞后，巨噬細胞微粒刺激THP-1細胞產生的IL-8含量都較未使用時降低，并且與抑制劑的濃度呈劑量依

7、賴性。當三種特異性抑制劑濃度為30μM時，IL-8含量分別降到31.3%、46.1%和51.4%。
　　結論：
　　(1)香煙煙霧可誘導THP-1細胞產生巨噬細胞微粒；
　　(2)巨噬細胞微粒可誘導THP-1細胞產生前炎癥因子IL-8；
　　(3)巨噬細胞微?？杉せ頔RK1/2/MAPK、JNK/MAPK和p38/MAPK通路，活化的ERK1/2/MAPK、JNK/MAPK和p38/MAPK通路可能與巨噬細胞微粒