去盆腔神經支配對大鼠結腸粘膜TRPV1和5-HT4受體表達的影響.pdf

1、背景:
　　近年來，盆腔神經損傷導致腸道功能障礙的研究逐漸引起人們的關注。臨床上觀察到隨著時間推移部分病人的癥狀有逐步改善的趨勢，但機制尚不清楚，所以闡明其代償恢復的機制對今后的治療研究有重要意義。
　　盆腔神經損傷后，結直腸功能主要依賴腸神經系統(tǒng)(enteric nervous system，ENS)進行代償。研究發(fā)現(xiàn)，腸粘膜內腸嗜鉻（enterochromaffin，EC）細胞感受腸腔內的機械化學刺激，并釋放5-羥色胺（

2、5-hydroxytryptamine，5-HT）是ENS調節(jié)結直腸動力的重要機制。TRPA1是腸EC細胞的重要感受器分子，可激活EC細胞釋放5-HT。5-HT可與粘膜下的末梢神經上的相應受體結合從而發(fā)揮調控腸動力的作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn)TRPA1在去盆腔神經支配(pelvic nerve denervation，PND)大鼠遠端結腸粘膜上的蛋白表達與腸動力恢復趨勢是相一致的，提示TRPA1在PND大鼠結腸動力適應性恢復中發(fā)揮重要作用。

3、
　　腸道粘膜上的另一感受器分子TRPV1，可以感知腸腔內的機械化學刺激及炎性疼痛，不僅與TRPA1共表達，并在功能上存在相互協(xié)同。研究發(fā)現(xiàn)TRPV1在小鼠遠端結腸內臟敏感性及運動功能調節(jié)中發(fā)揮重要作用。所以，是否TRPV1也參與盆腔神經損傷后結腸動力的適應性恢復引起我們的關注。
　　5-HT是腸道重要的信號分子，在消化道的感覺、運動調節(jié)中發(fā)揮重要作用。已知5-HT4受體廣泛分布于ENS末梢的內在初級傳入神經元(intrin

4、sic primary afferentneurons，IPANs) IPANs，在PND大鼠，失去了外來神經的支配后，EC細胞釋放的5-HT是否更多地與IPANs上的5-HT4受體結合從而發(fā)揮代償作用，這尚不清楚。所以5-HT4受體也成為我們此次研究的關鍵之一。
　　目的:
　　1、觀察TRPV1在PND大鼠遠端結腸粘膜中的表達變化，研究其在PND大鼠結腸動力恢復中的作用;
　　2、觀察5-HT4受體在PND大鼠遠端

5、結腸粘膜中的表達情況，探討其在PND大鼠結腸動力恢復中的作用。
　　方法:
　　將72只成年大鼠隨機分成PND組、假手術組2組。免疫組織化學染色、Western blot檢測大鼠遠端結腸粘膜術后1、3、7天的TRPV1、5-HT4受體蛋白表達，實時定量PCR(Real-time Quantitative PCR，RT-qPCR)檢測TRPV1、5-HT4受體在大鼠遠端結腸粘膜術后1、3、7天的mRNA水平。
　　結果:

6、
　　1.TRPV1表達情況
　　(1)免疫組化染色結果顯示:與假手術組相比，PND大鼠術后第1天遠端結腸粘膜TRPV1免疫陽性表達顯著減少，術后第3、7天逐步增加;
　　(2)Western blot檢測結果:與假手術組相比，PND大鼠術后第1天遠端結腸粘膜TRPV1蛋白表達顯著下調，術后第3、7天逐步恢復;
　　(3)RT-qPCR檢測結果:與假手術組相比，術后第1天的PND大鼠遠端結腸粘膜TRPV1 mRN

7、A水平顯著降低，術后第3、7天逐步上調。
　　2.5-HT4受體表達情況
　　(1)免疫組化染色結果顯示:與假手術組相比，PND大鼠術后第1天遠端結腸粘膜5-HT4受體免疫陽性表達顯著減少，術后第3、7天逐步增加;
　　(2)Western blot檢測結果:與假手術組相比，PND大鼠術后第1天遠端結腸粘膜5-HT4受體蛋白表達顯著下調，術后第3、7天逐步恢復;
　　(3)RT-qPCR檢測結果:與假手術組相比，