CYP2D6基因多態(tài)性對普羅帕酮體外代謝的影響.pdf

1、目的:通過研究25個基因型（野生型CYP2D6*1和24個變異型）的催化活性，以及CYP2D6基因多態(tài)性對普羅帕酮體外代謝的影響，為實現(xiàn)臨床普羅帕酮安全用藥提供一定的參考。
　　方法:
　　1.建立UPLC檢測方法，用以檢測普羅帕酮以及5-羥基普羅帕酮。
　　2.25個基因型在昆蟲細胞中表達，每個變異型都是以1-100μM普羅帕酮為底物，在37℃水浴中孵育，模擬體內(nèi)代謝，對其催化活性進行評估。孵育30分鐘后，立刻置于-

2、80℃冰箱終止反應。樣品經(jīng)過提取處理后，用超高效液相色譜儀進行檢測。實驗所得相關數(shù)據(jù)用Graphpad Prism5軟件進行處理，得到Km，Vmax值，清除率=Vmax/Km.
　　結果:
　　1.建立的超高效液相色譜法樣品處理簡便，耗時短，所用萃取液乙酸乙酯毒性較小，普羅帕酮，5-羥基普羅帕酮，內(nèi)標地西泮在所設定的色譜條件下互不干擾，峰形良好。
　　2.與野生型CYP2D6*1相比，其余所有CYP2D6變異型的清除率

3、均發(fā)生顯著性改變。三個變異型(CYP2D6*87，CYP2D6*90，CYP2D6*F219S)的清除率顯著性增高(129％-165％)，另外21個變異型由于Km值增高或者Vmax值降低，清除率顯著性降低(16％-85％)。重組酶CYP2D6*92和*96可能由于酶活性很弱或者喪失，未檢測到任何代謝產(chǎn)物。
　　結論:本實驗建立的超高效液相色譜法檢測普羅帕酮及其代謝產(chǎn)物可成功用于其體外實驗的檢測。體外數(shù)據(jù)結果表明，對于普羅帕酮體外代