Cry1Ac抗、感棉鈴蟲中腸BBMV分離、純化及其與Cry1A的結(jié)合模型.pdf

1、棉鈴蟲Helico verpa armigera(Hubner)是世界性重要農(nóng)業(yè)害蟲,隨著轉(zhuǎn)Bt基因棉花種植面積的快速增長,棉鈴蟲對Bt的抗性研究日顯重要.該研究在獲得CrylAc抗性棉鈴蟲的基礎(chǔ)上,分離、純化了棉鈴蟲中腸BBMV(Brush Border Membrane Vesicles,BBMV),并著重研究了三種CrylA毒蛋白與抗、感品系棉鈴蟲中腸BBMV的結(jié)合動力學(xué),構(gòu)建了抗、感品系BBMV與三種CrylA蛋白間的結(jié)合模型,

2、主要結(jié)果如下:利用差速離心法,分離了CrylAc抗、感棉鈴蟲品系中腸BBMV.通過SDS-PAGE電泳發(fā)現(xiàn):敏感品系的蛋白條帶較抗性的多,其大小主要集中在53~170kDa之間,其中敏感品系中存在一條抗性品系所不具有的大小為110kDa的蛋白.采用親和層析的方法分離純化了棉鈴蟲中腸CrylAc受體蛋白,得到一條大小約為175kDa的蛋白條帶.利用<'125>I標記三種CrylA(CrylAa、CrylAb和CrylAc)蛋白,分別與Cr

3、ylAc抗、感品系棉鈴蟲中腸BBMV進行了體外標記結(jié)合試驗.同源競爭結(jié)果顯示:兩個品系的BBMV與CrylAc的親和性沒有顯著差異,但抗性品系的結(jié)合位點濃度明顯下降;異源競爭結(jié)合試驗表明:敏感品系棉鈴蟲中腸BBMV存在三個CrylA受體位點,受體1與三類CrylA蛋白均發(fā)生結(jié)合,受體2與CrylAb和CrylAc發(fā)生結(jié)合,而受體3僅與CrylAc發(fā)生結(jié)合.棉鈴蟲對CrylAc產(chǎn)生抗性后,受體1仍然與三類CrylA蛋白發(fā)生結(jié)合,但是與Cr

4、ylAb的結(jié)合能力變?nèi)?受體2與CrylAb發(fā)生結(jié)合,但不再與CrylAc發(fā)生結(jié)合.Western雜交證實:敏感品系棉鈴蟲中BBMV存在三個CrylAc的受體,其大小分別為110、120和175kDa;而CrylAc抗性棉鈴蟲只存在兩個CrylAc的受體,即缺失了一條110kDa的蛋白,并據(jù)此構(gòu)建了棉鈴蟲CrylAc抗、感品系的結(jié)合模型.上述研究表明棉鈴蟲中腸BBMV與Cry1A結(jié)合的受體位點分別位于不同的蛋白上,其中一個受體結(jié)合位點的