瘦素對皮膚衰老氧化應激水平影響的實驗研究.pdf

1、目的:
　　建立接近人體皮膚老化過程的快速、簡便、經(jīng)濟的實驗動物模型，結合皮膚老化的氧化應激學說，驗證瘦素(Leptin)對皮膚老化過程中活性氧(ROS)生成及抗氧化防御能力的影響及調(diào)控，判明瘦素在延緩皮膚衰老過程中可能發(fā)揮的作用及其機制，從而為瘦素在抗皮膚老化甚至再生受損皮膚的應用尋找實驗及理論依據(jù)，為皮膚抗衰老再生醫(yī)學研究提供新的思路。
　　方法:
　　1.模擬人體皮膚衰老的內(nèi)外源誘發(fā)因素，以D-gal注射聯(lián)合UV

2、輻照的方式，設置單一D-gal注射組、單一UV輻照組及空白對照組，從組織形態(tài)學（組織HE染色、Masson三色染色、彈力纖維染色）改變及氧化應激分子指標和代謝產(chǎn)物檢測等變化，分別進行比較分析，尋找經(jīng)濟的實驗動物、有效的干預措施和合理的干預時間，構建快速、經(jīng)濟、實用、周期短、更接近人體皮膚老化進程和規(guī)律的動物模型。
　　2.在構建的皮膚老化動物模型基礎上，設置空白對照和試驗對照，試驗組分為低(5ug/g)、中(10ug/g)、高(2

3、0ug/g)三個劑量組給予瘦素腹腔內(nèi)注射，6周后取材對皮膚組織形態(tài)學和組織勻漿氧化應激生化指標進行比較，研究瘦素調(diào)控氧化應激、延緩皮膚老化的作用及可能的最適劑量。
　　3.將瘦素溶液配制為低(5μg/ml)、中(10μg/ml)、高(20μg/ml)濃度，對培養(yǎng)的HSFs進行預處理，之后行UV輻照，誘導細胞老化。檢測HSFs細胞活力、SA-β-gal活性、氧化應激生化指標及Western-blot測定HSFs中p67phox，PK

4、Cε和p66Shc蛋白的表達。研究瘦素延緩老化、調(diào)控氧化應激的可能機制。
　　結果:
　　1.對CD-1小鼠以每日UV輻照能量611.28mJ/cm2，隔日一次，聯(lián)合D-gal劑量1mg/g/D，每日頸背部皮下注射的聯(lián)合措施，與其他干預組對比，干預后6周可見明顯的皮膚衰老組織形態(tài)學變化，氧化應激水平也在6周達到相對穩(wěn)定狀態(tài)，較其他干預組時間縮短，誘發(fā)老化效果更明顯。
　　2.瘦素系統(tǒng)應用，可明顯緩解D-gal聯(lián)合UV誘

5、發(fā)皮膚衰老的組織學變化。瘦素在皮膚局部發(fā)揮出抗氧化作用，保護抗氧化酶、減少脂質(zhì)過氧化和膠原蛋白的降解。同時發(fā)現(xiàn)，瘦素對抗皮膚老化進程中的氧化應激反應有劑量選擇性，本實驗中，中等劑量的瘦素(10ug/g)對衰老皮膚抗氧化酶的保護、拮抗脂質(zhì)過氧化和膠原蛋白降解，能發(fā)揮更好的作用(P＜0.05)。
　　3.瘦素干預可以緩解UV對人成纖維細胞抗氧化酶活性的降低作用及對膜脂質(zhì)和膠原蛋白的破壞作用，可有效降低UV輻照誘導的成纖維細胞p67ph