人參皂苷Rg1拮抗D-半乳糖致大鼠腦衰老及機制研究.pdf

1、目的:干細胞衰老是生物體衰老的最新學說,調控干細胞衰老對延緩機體衰老和防治老年性疾病至關重要。神經干細胞（NSCs）衰老與神經系統(tǒng)退行性疾病密切相關。我們前期工作證明,人參皂苷Rg1是“補氣”中藥人參重要的抗衰老成分,有益智與延緩腦衰老作用。人參皂苷Rg1調控NSCs衰老研究僅見本課題組報道，但其分子機理還不清楚。本課題將干細胞最新理論和技術與中醫(yī)學抗衰老理論和對干細胞認識緊密結合起來，通過構建NSCs體內/外衰老模型，研究人參皂苷Rg

2、1調控NSC衰老與延緩腦衰老的關系。課題旨在闡釋中醫(yī)“氣血理論”和“補氣延衰”途徑調控NSC衰老的現(xiàn)代生物學機理，對防治神經系統(tǒng)退行性疾病提供理論與實驗室依據。
　　方法:
　　1.人參皂苷Rg1拮抗D-半乳糖致大鼠腦衰老作用的研究
　?。?）實驗分組：雄性SD大鼠隨機分為4組每組10只。腦衰老模型組：大鼠皮下注射D-半乳糖（120mg/kg）qd×42；Rg1腦衰老模型組：在腦衰老模型復制同時，從16d起腹腔注射人參

3、皂苷Rg1（20mg/kg）qd×27；Rg1正常組：大鼠皮下注射等量生理鹽水，16d起開始腹腔注射人參皂苷Rg1（20mg/kg）qd×27；正常組：注射等時與等量生理鹽水。模型復制結束或藥物注射完成第2d進行相關實驗。
　　（2）檢測指標：水迷宮實驗檢測各組大鼠的空間記憶能力；β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色檢測腦切片；ELISA檢測海馬區(qū)組織IL-1、IL-6炎癥因子含量變化；比色法檢測海馬區(qū)組織抗氧化指標SOD、GS

4、H變化；Southern blotting和PCR-ELISA方法檢測海馬區(qū)端粒長度和端粒酶活性變化；Western blotting及RT-PCR檢測海馬組織P53及p19、p21含量變化。
　　2.人參皂苷Rg1拮抗D-半乳糖致神經干細胞衰老初步研究
　　提取 SD胎鼠大腦神經干細胞（NSCs），離體培養(yǎng)，免疫熒光染色及流式細胞儀檢測NSCs及第三代培養(yǎng)細胞純度。
　　（1）實驗分組：將第三代NSCs分為4組。正常

5、組：常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)96h；Rg1正常組：常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)48h，加人參皂苷Rg18μg/ml繼續(xù)培養(yǎng)48h；腦衰老模型組：常規(guī)培養(yǎng)基中加D-半乳糖10mg/ml作用48h，再常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)48h；Rg1抗NSCs衰老模型組：前48h同NSCs衰老模型組，后48h加人參皂苷Rg18μg/ml培養(yǎng)。
　?。?）檢測指標：計數各組細胞成球數檢測增殖能力；神經球β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色檢測細胞球衰老情況；比色法和流式細胞儀檢測

6、培養(yǎng)液中MDA與細胞內ROS變化；RT-PCR檢測p19、p21、p53表達情況。
　　結果:
　　1.腦衰老模型組大鼠空間記憶能力減退，腦組織切片SA-β-Gal染色陽性顆粒增多，海馬區(qū)組織內SOD活性降低，GSH含量減少，IL-1、IL-6含量增多，端粒長度縮短，端粒酶活性降低,P53、p19、p21含量增高。
　　2.Rg1拮抗D-半乳糖腦衰老模型組大鼠空間記憶能力有明顯改善，SA-β-Gal染色藍色顆粒減少，海

7、馬區(qū)組織內SOD活性增高，GSH含量增多，IL-1、IL-6含量減少，端粒長度縮短受到阻止，端粒酶活性增高，P53、p19、p21含量降低。
　　3.Rg1正常組大鼠與正常組大鼠相比空間記憶能力增強，SA-β-Gal染色藍色顆粒減少，海馬區(qū)IL-1、IL-6含量減少。
　　4.神經干細胞衰老模型組細胞增殖能力降低，神經球β-半乳糖苷酶染色陽性率增高，培養(yǎng)基中MDA及細胞ROS增高，細胞內p19、p21、p53含量增高。

8、>　　5.Rg1拮抗D-半乳糖神經干細胞衰老模型組細胞增殖能力上升、神經球β-半乳糖苷酶陽性率降低，培養(yǎng)基中MDA及細胞ROS下降，細胞p19、p21、p53含量下降；Rg1正常組與正常組相比，培養(yǎng)基中MDA及細胞ROS下降。
　　結論:
　　1.人參皂苷Rg1可能通過調節(jié)端粒系統(tǒng)、衰老相關基因、炎癥因子水平和抗氧化作用拮抗D-半乳糖致大鼠腦衰老。
　　2.人參皂苷Rg1抗腦衰老作用機制可能與拮抗D-半乳糖致氧化作用,