人臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞對白細(xì)胞介素1β誘導(dǎo)大鼠髓核細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　研究人臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞（hWJCs）對白細(xì)胞介素1β誘導(dǎo)大鼠髓核細(xì)胞（NPCs）凋亡的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　在體外進(jìn)行hWJCs和NPCs的原代培養(yǎng)，傳至第3代用流式細(xì)胞儀對hWJCs進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定，測定hWJCs的CD29、CD44、CD34、CD45及HLA-DR位點(diǎn)。將第3代髓核細(xì)胞分成3組：（1）對照組（A組）單獨(dú)培養(yǎng)NPCs，不予IL-1β刺激且不與hWJCs共培養(yǎng)；

2、（2）IL-1β干預(yù)組（B組）用10ng/ml的IL-1β干預(yù)24小時，然后更換為完全培養(yǎng)基再培養(yǎng)24小時；（3）共培養(yǎng)組（C組）用10ng/m的IL-1β干預(yù)24小時，再更換為完全培養(yǎng)基與hWJCs非接觸共培養(yǎng)24小時；用Annexin V/PI染色后使用流式細(xì)胞儀測定3組髓核細(xì)胞（NPCs）凋亡率；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）測定各組NPCs的ADAMTs-4（金屬蛋白酶-4），MMPs-3（基質(zhì)金屬蛋白酶-3），TIMP

3、-1（基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1）的表達(dá)情況；用caspase試劑盒分別檢測各組髓核細(xì)胞（NPCs）的caspase-3、caspase-8和caspase-9相對表達(dá)活性。
　　結(jié)果：
　　根據(jù)流式細(xì)胞儀檢測的結(jié)果證實(shí)培養(yǎng)的第三代hWJCs超過99％的CD29和CD44陽性，小于3％的CD34、CD45、HLA-DR陽性，hWJCs細(xì)胞純度良好。應(yīng)用流式細(xì)胞儀所測得的B、C組髓核細(xì)胞（NPCs）的凋亡率均比A組高（p<0.0

4、5）， C組凋亡率又比B組低（p<0.05）。用RT-PCR所測3組髓核細(xì)胞ADAMTs-4、MMPs-3、TIMP-1的相對表達(dá)量，B、C組的ADAMTs-4、MMPs-3表達(dá)量均比A組高（p<0.05）；C組ADAMTs-4、MMPs-3的表達(dá)量比B組低（p<0.05）。B、C組TIMP-1的表達(dá)量比A組低（p<0.05）；B組TIMP-1的表達(dá)量又比C組低（p<0.05）。caspase-3、caspase-8、caspase-9