毒素探針調(diào)節(jié)前列腺癌Mat-LyLu細(xì)胞轉(zhuǎn)移的差異質(zhì)膜蛋白質(zhì)及磷酸化蛋白質(zhì)分析.pdf

1、腫瘤轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的首要因素，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，九成以上的腫瘤患者死于腫瘤轉(zhuǎn)移而不是原發(fā)性腫瘤。腫瘤轉(zhuǎn)移的程度與電壓門(mén)控鈉離子通道的表達(dá)有關(guān)，腫瘤細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移受鈉通道（尤其是Nav1.7亞型）激活或者抑制的影響。
　　研究表明Nav1.7在高轉(zhuǎn)移性前列腺癌Mat-LyLu細(xì)胞上特異性高表達(dá)，并促進(jìn)其轉(zhuǎn)移活性，但分子機(jī)制尚不清楚。磷酸化修飾和互作蛋白是鈉通道功能執(zhí)行和調(diào)控的必要途徑:一方面磷酸化修飾在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中發(fā)揮重

2、要作用，在Nav1.7活性受到影響時(shí)，其磷酸化修飾會(huì)出現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化;另一方面，Nav1.7活性的改變可以通過(guò)與不同類(lèi)型的蛋白質(zhì)發(fā)生互作來(lái)行使功能。闡明在Mat-LyLu細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程中Nav1.7互作蛋白和磷酸化修飾能夠?yàn)镹av1.7調(diào)節(jié)Mat-LyLu細(xì)胞轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。
　　因此，第一部分，我們利用兩種作用于Nav1.7的多肽毒素JZTX-Ⅰ和HNTX-Ⅲ處理大鼠前列腺癌Mat-LyLu細(xì)胞，結(jié)合iTRAQ標(biāo)記與TiO

3、2富集，通過(guò)LC-MS/MS質(zhì)譜鑒定比較JZTX-Ⅰ處理組（轉(zhuǎn)移增強(qiáng)組）、Control組（對(duì)照組）和HNTX-Ⅲ處理組（轉(zhuǎn)移減弱組）中的差異磷酸化蛋白質(zhì)。我們一共鑒定到1919條非冗余磷酸化肽段，包含3519個(gè)磷酸化位點(diǎn)，在657個(gè)非冗余磷酸化蛋白質(zhì)上。在至少兩個(gè)iTRAQ平行組中都鑒定到的磷酸化蛋白質(zhì)有446個(gè)（對(duì)應(yīng)1106條磷酸化肽段，將這一組記為iTRAQ-O)，這些蛋白主要參與細(xì)胞生理進(jìn)程和代謝，行使各種分子結(jié)合以及轉(zhuǎn)錄共激活

4、活性功能。通過(guò)在線(xiàn)motif-X軟件對(duì)iTRAQ-O組1106條磷酸化肽段進(jìn)行了基于序列的motif富集分析，一共發(fā)現(xiàn)13種絲氨酸motif序列、4種蘇氨酸motif序列及1種酪氨酸motif序列。我們收集了iTRAQ-O組中446個(gè)overlap磷酸化蛋白質(zhì)的定量信息，得到每個(gè)磷酸化蛋白質(zhì)114/116和115/116這兩項(xiàng)比值，通過(guò)將比值≤0.67及比值≥1.5作為閾值共得到120個(gè)差異磷酸化蛋白質(zhì)，將這些蛋白分成七組進(jìn)行了相關(guān)生物

5、信息學(xué)分析，并從中找出與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異磷酸化蛋白質(zhì)，通過(guò)STRING軟件分析了其蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)。
　　第二部分，我們利用Nav1.7的激活劑藜蘆堿處理Mat-LyLu細(xì)胞，提取質(zhì)膜，結(jié)合雙向電泳和質(zhì)譜鑒定，一共獲得29個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)，其中，與對(duì)照組相比，藜蘆堿處理組中表達(dá)下調(diào)的蛋白有28個(gè)，表達(dá)上調(diào)的蛋白有1個(gè)。在29個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)中，我們通過(guò)功能注釋分析，得到了與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的4個(gè)蛋白質(zhì):Tonsoku-li