抗菌肽Cecropin B-人溶菌酶融合蛋白基因的設(shè)計(jì)、克隆及在大腸桿菌中的表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖窍胪ㄟ^(guò)基因重組，以融合的形式將CecropinB和人溶菌酶基因連接至高效的大腸桿菌表達(dá)載體上并進(jìn)行表達(dá)，進(jìn)一步探討融合蛋白的抗菌和抗病毒活性，以期研制出具有更高活性的抗菌和抗病毒重組蛋白。為了構(gòu)建抗菌肽B(CecropinB)和人溶菌酶(hLyso)的基因克隆載體，通過(guò)重疊區(qū)擴(kuò)增法人工合成抗菌肽B基因，從pUC118-hLyso上卸下人溶菌酶基因，然后按照正確的閱讀框架融合并重組至克隆載體中。通過(guò)對(duì)重組質(zhì)粒的測(cè)序，表明融合基

2、因CecropinB-humanLysozyme已經(jīng)正確克隆至pBS-T載體中，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌里，使目的基因能夠在大腸桿菌里保存并且大量擴(kuò)增，為構(gòu)建表達(dá)載體表達(dá)融合蛋白抗菌肽CecropinB-人溶菌酶奠定了基礎(chǔ)。將重組后得到的克隆載體用引物擴(kuò)增，凝膠電泳后回收目的條帶，然后將回收條帶和大腸桿菌表達(dá)載體pET32a用同樣的限制性內(nèi)切酶切割，用T4DNA連接酶將兩者連接。經(jīng)測(cè)序及酶切鑒定融合基因CecropinB-人溶菌酶已經(jīng)正確

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