Fgl2過表達下調PD-1的表達對自身免疫性心肌炎大鼠心功能的影響及分子機制研究.pdf

1、目的：
　　本實驗目的在于建立大鼠自身免疫性心肌炎模型，通過對免疫負性調控信號分子PD-1在自身免疫性心肌炎大鼠心肌中的表達情況的檢測，分析其在自身免疫性心肌炎病程發(fā)展中的意義，并以慢病毒介導Fgl2基因過表達進行干預，探討Fgl2作為治療自身免疫性心肌炎心肌免疫性損傷的干預靶點的可行性及其相關機制。
　　方法：
　　選擇購買SPF級雄性6-7周齡Lewis大鼠32只，隨機選取8只為正常對照組（NC組），余24只為實驗

2、組：以純化的豬心肌肌球蛋白（PCM）皮下注射法建立大鼠實驗性自身免疫性心肌炎模型。實驗組隨機分為3組，每組8只，即實驗性自身免疫性心肌炎組（EAM組）、Fgl2慢病毒過表達自身免疫性心肌炎組（EAM-Fgl2組）、空載體組（EAM-GFP組）。EAM-Fgl2組與EAM-GFP組大鼠于造模第1天，分別經(jīng)大鼠尾靜脈注射包裝好的Fgl2過表達慢病毒載體和等量的GFP慢病毒載體（5x107TU/只）。第40天，對各組大鼠行超聲心動圖檢測，分別

3、測定LVEDd、LVEDs、LVEF、LVFS等指標。完成超聲檢測后，摘除眼球取血提取血清，用于ELISA檢測IL-17、IL-6、INF-γ炎性因子及BNP水平。處死大鼠后摘除心臟，一部分用于HE染色觀察心肌炎性程度，另一部分用于提取蛋白，Western blot檢測Fgl2、PD-1、Foxp3、RORγt蛋白表達，提取心肌組織mRNA，RT-PCR檢測Fgl2、PD-1、Foxp3、RORγt的mRNA的表達情況。
　　結果

4、：
　?。?）實驗組大鼠出現(xiàn)明顯的心功能不全的表現(xiàn)：免疫40天后，實驗組大鼠出現(xiàn)弓背，呼吸頻率增快，進食量、進水量、活動量均明顯減少，體重減輕。
　?。?）心功能改變情況：超聲心動圖檢測示，實驗組大鼠心臟明顯擴大，HR、LVEF、LVFS較NC組降低，其中EAM-Fgl2組降低更明顯（P>0.05），提示Fgl2過表達加重心功能惡化程度。
　?。?）心肌病理切片HE染色觀察心肌損傷程度：正常組心肌細胞形態(tài)結構未見明顯改

5、變；實驗組可見心肌細胞肥大，肌纖維排列紊亂，間質水腫；EAM-Fgl2組表現(xiàn)為心肌細胞變性、壞死，間質纖維化，可見嗜酸性粒細胞、淋巴細胞浸潤。Rezkalla法計算心肌炎性積分， EAM-Fgl2組較 EAM組炎性積分增高（P>0.05）。
　?。?）血清ELISA檢測相關炎癥因子及BNP水平：與NC組比較，實驗組大鼠血清中BNP、IL17、IL-6的表達水平增高（P<0.05），其中EAM-Fgl2組與EAM組相比，BNP、IL

6、-6及IL17明顯升高（P<0.05），EAM組與 EAM-GFP組無差異。
　?。?）RT-PCR及Western blot檢測結果示：實驗組Fgl2、RORγt、Foxp3的mRNA及蛋白表達量均較NC組增高（P<0.05），PD-1的mRNA及蛋白的表達量較NC組降低，EAM-Fgl2組Fgl2過表達使Fgl2的mRNA及蛋白表達量明顯增高，PD-1的mRNA蛋白表達量則較EAM組進一步降低（P<0.05）。
　　結論