小鼠胚胎早期發(fā)育過(guò)程中Xist基因的轉(zhuǎn)錄模式.pdf

1、雌性動(dòng)物的劑量補(bǔ)償效應(yīng)是通過(guò)細(xì)胞中一條X染色體的轉(zhuǎn)錄失活來(lái)實(shí)現(xiàn)的.失活的染色體上面往往發(fā)生一系列的修飾,導(dǎo)致產(chǎn)生非常穩(wěn)定的異染色質(zhì)且能在細(xì)胞復(fù)制的過(guò)程中穩(wěn)定遺傳.X染色體失活與位于"X染色體失活中心"(XIC)上Xist基因息息相關(guān),主要表現(xiàn)在Xist的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物通過(guò)包圍一條X染色體使其沉默.由于其在X染色體失活中的重要作用,對(duì)Xist的研究一直是近幾年的研究熱點(diǎn).其中很重要的一點(diǎn)就是試圖建立Xist染色體在發(fā)育過(guò)程中的時(shí)空轉(zhuǎn)錄模式.但是

2、由于胚胎發(fā)育早期Xist轉(zhuǎn)錄本數(shù)量的稀少而難以達(dá)到很好的效果.該實(shí)驗(yàn)采用巢氏RT-PCR方法,對(duì)來(lái)自體外培養(yǎng)的處于各個(gè)發(fā)育時(shí)期的小鼠胚胎進(jìn)行了分析和性別鑒定.首先提取了6周齡昆明白小鼠幾個(gè)組織的RNA,用普通反轉(zhuǎn)錄法擴(kuò)增Xist和Sry以確定RT-PCR的條件,Sry的主要作用是用來(lái)做性別鑒定.最終將其反應(yīng)條件確定為退火溫度55℃,Sry和Xist可以置于同一體系中擴(kuò)增.然后利用實(shí)驗(yàn)一確定的PCR條件,以Hprt為陽(yáng)性對(duì)照,用巢式RT-

3、PCR對(duì)小鼠早期胚胎進(jìn)行Xist基因的轉(zhuǎn)錄分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)錄Sry基因的睪丸組織以及雄性胚胎,從受精卵發(fā)育到囊胚的過(guò)程中,基本上不轉(zhuǎn)錄Xist基因;不轉(zhuǎn)錄Sry基因的雌性卵母細(xì)胞和雌性胚胎,從出現(xiàn)原核開(kāi)始,到發(fā)育至2-細(xì)胞期的過(guò)程中,Xist基因一直不轉(zhuǎn)錄,但是,從4-細(xì)胞期開(kāi)始,一直到孵化前囊胚階段,雌性胚胎都轉(zhuǎn)錄Xist基因.實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,X染色體的失活最早出現(xiàn)在胚胎發(fā)育的4-細(xì)胞階段.同時(shí)由于從原核時(shí)期擴(kuò)增到了Sry,該文認(rèn)為胚