新型MIF小分子抑制劑的發(fā)現(xiàn)及其抗炎活性研究.pdf

1、巨噬細(xì)胞遷移抑制因子(MIF)是一種關(guān)鍵的多功能蛋白質(zhì)，在先天性免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答反應(yīng)中起著重要的調(diào)節(jié)作用。MIF作為一種促炎細(xì)胞因子，可以促進(jìn)其它炎癥因子的釋放，拮抗糖皮質(zhì)激素的免疫抑制作用，被認(rèn)為是一個(gè)強(qiáng)有力的抗炎作用的靶點(diǎn)。此外，MIF還具有催化活性，MIF互變異構(gòu)酶抑制劑在多種動(dòng)物炎癥模型上顯示出良好的治療保護(hù)效果。因此，以MIF互變異構(gòu)酶活性為靶點(diǎn)，開發(fā)新型小分子抑制劑成為一種重要的針對(duì)MIF相關(guān)疾病的治療策略。

2、　　本研究采用分子對(duì)接打分等計(jì)算機(jī)虛擬篩選方法從化合物庫(kù)中篩選出可能與MIF活性位點(diǎn)相結(jié)合的化合物，接下來(lái)通過(guò)酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)從中篩選出10個(gè)有效的酶活性抑制劑，其中有3個(gè)化合物（＃1，#2和#9）的IC50均比ISO-1（MIF典型抑制劑，IC50=14.4?M）低，尤其是#1的IC50已經(jīng)達(dá)到納摩爾級(jí)別（IC50=550 nM），抑制活性是已知的MIF抑制劑ISO-1的26倍。進(jìn)一步的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明這三個(gè)化合物對(duì)MIF誘導(dǎo)的生物活性

3、包括糖皮質(zhì)激素的免疫抑制，細(xì)胞趨化作用以及磷酸化ERK的激活也具有強(qiáng)烈的抑制作用，而且比ISO-1效果更為顯著。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)神經(jīng)退行性疾病與膠質(zhì)細(xì)胞激活誘導(dǎo)的炎癥有關(guān)，MIF酶活性抑制劑在外周巨噬細(xì)胞的抗炎保護(hù)作用已經(jīng)明確，但是對(duì)于神經(jīng)炎癥的作用尚未有報(bào)道，因此我們進(jìn)一步研究了#1（命名為Z-590）在BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞激活產(chǎn)生神經(jīng)炎癥中的作用，結(jié)果顯示Z-590通過(guò)抑制MAPKs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可以顯著的抑制LPS誘導(dǎo)激活的BV-2小膠質(zhì)細(xì)

4、胞中一氧化氮（NO），腫瘤壞死因子，白介素6（IL-6），白介素1?（IL-1?），環(huán)氧合酶（COX-2），誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）的產(chǎn)生以及 ROS的釋放，顯示出強(qiáng)有力的抗炎作用。此外，Z-590還可以顯著降低激活的BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)周圍鄰近HT22海馬神經(jīng)元細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞毒性作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明Z-590不僅可以顯著抑制MIF互變異構(gòu)酶活性，對(duì)MIF的生物活性以及LPS介導(dǎo)神經(jīng)炎癥也具有強(qiáng)烈的抗炎保護(hù)作用。然而Z-590類似物

5、的構(gòu)效關(guān)系及其內(nèi)在活性還不清楚。因此，我們通過(guò)相似性搜索以及化學(xué)合成的方法，得到了Z-590的一系列類似物，其中有31個(gè)化合物的MIF酶抑制活性IC50均在10M以下，6個(gè)化合物在1?M以下。酶活性最強(qiáng)的#5（IC50=370 nM），不僅可以在體外抑制脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞的活化，顯著降低TNF-和IL-6等炎癥因子的產(chǎn)生，對(duì)于體內(nèi)LPS引起的小鼠內(nèi)毒素休克死亡也具有一定的保護(hù)作用，存活率在0.5mg/kg劑量時(shí)從0增加到35