大鼠急性在體心肌缺血再灌注損傷模型建立及評估.pdf

1、隨著社會發(fā)展，我國已逐漸步進入老齡化社會，心腦血管病已成為威脅人民健康的重大疾病之一。據(jù)聯(lián)合國預測，到2020年我國65歲以上老齡人口將達1.67億人，約占全世界老齡人口6.98億人的24％，全世界四個老年人中就有一個是中國老年人，心血管疾病將在我國大流行。為了應對心血管疾病，心肌血運重建技術已在臨床上廣泛應用并蓬勃發(fā)展。由于溶栓療法、冠脈搭橋術、導管技術、經(jīng)皮冠狀動脈血管成形術及心臟外科體外循環(huán)的建立和推廣，患者生存率已明顯提高。但臨

2、床工作者不得不面對一個難題，就是心肌缺血-再灌注損傷(miocardialischemia-reperfusion injury，MIRI)。MIRI越來越受到人們的關注，許多臨床工作者嘗試模擬心肌缺血再灌注損傷過程。但如何進行有效的、符合臨床疾病特征且具有操作相對簡單、穩(wěn)定性高、重復性好的模擬，成為眾多專家學者研究的熱點。鑒于缺血再灌注損傷的臨床實驗受到限制，本實驗以阻斷大鼠LAD造成急性心肌缺血，并在預定時間內恢復血流，模擬人缺血再

3、灌注過程，結合本實驗室條件建立一種有效的、適合臨床研究的在體缺血再灌注模型，為以后研究缺血再灌注損傷機制及藥物在缺血再灌注損傷中起到的可能機制打下基礎。
　　 材料與方法：
　　 健康SD大鼠30只(SPF級，由中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院實驗動物中心提供)，體重(240±10)g，雌雄不限。30只大鼠隨機分為2組，每組15只。A組為假手術組（對照組），B組為缺血再灌注組（手術組）。實驗時10％水合氯醛(0.32ml/100

4、g)腹腔注射麻醉大鼠，頸部及左胸備皮，并仰位固定于手術臺，頸胸部碘伏常規(guī)消毒。大鼠頸動脈置管，以備取血補液及全身肝素化，后經(jīng)口插入適當長度的16G套管針作為氣管插管，氣管插管接小動物呼吸機，連接多導生理記錄儀心電監(jiān)護，記錄各組各時間段通用導聯(lián)心電圖的波形變化，自左側3～4肋間開胸，打開心包暴露心臟，用鑷子掀開左心耳，自左心耳下方2～3mm入針，以prolene:6-0線在冠脈左前降支下縫過，縫扎的中點在左心耳和肺動脈圓錐的交界和心尖連線

5、上，在肺動脈圓錐旁出針，結扎時用一細硬膜外麻醉管墊子血管與結扎線之間，對照組只穿線不結扎冠脈，直接關胸，手術組缺血30min后抽出硬膜外麻醉管，剪斷結扎線使心肌再灌注，待心電圖恢復穩(wěn)定5min后關胸。術前經(jīng)頸動脈注射肝素(150u/kg)一避免血栓形成，分別于術前30min及心肌缺血再灌注24h后取血，取血后3000轉/分，離心10分，取血清保存于-20度冰箱，后統(tǒng)一分裝，經(jīng)全自動生化分析儀測定肌酐激酶同工酶MB（Creatine Ki

6、nase-MB），乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase)。實驗結束后經(jīng)原切口開胸，經(jīng)升主動脈根部迅速摘取大鼠心臟，應用TTC心肌染色法計算心肌梗死范圍。采用SPSS17.0軟件包分析，用均數(shù)±標準差表示(x±s)，兩組間行t檢驗，以P＜0.05作為檢驗標準。
　　 結果：
　　 1、心電圖的變化
　　 假手術組（對照組）大鼠在正常開胸狀態(tài)下，僅偶爾出現(xiàn)室性早搏，手術組結扎后及再灌注時均見典型心電

7、圖(ECG)變化，表現(xiàn)為結扎冠狀動脈后，心電圖表現(xiàn)為R波增高、變寬，伴ST段抬高，伴有心律失常（包括室性早搏及短陣室性心動過速），再灌注后表現(xiàn)為增高的R波振幅回落，抬高的ST段下降，并伴有室早等心律失常，時間延長，心律失常逐漸消失。
　　 2、心肌梗死范圍的影響
　　 對照組大鼠心肌TTC染色后，未見明顯心肌梗死;手術組大鼠心肌梗死范圍為30.8±4.55％。
　　 3、對血清肌酸激酶同工酶MB影響
　　

8、 手術組血清肌酸激酶同工酶MB較對照組在缺血前30分變化無差異;手術組再灌注24小時后血清肌酸激酶同工酶MB明顯高于對照組(P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義。
　　 4、對血清乳酸脫氫酶影響
　　 手術組血清乳酸脫氫酶較對照組在缺血前30分變化無差異;手術組再灌注24小時后血清乳酸脫氫酶明顯高于對照組(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結論：
　　 1、本實驗聯(lián)合心電圖改變，心肌標記物（肌酸激酶同