紫藤葉斑病的病原鑒定及生物學(xué)特性研究.pdf

1、紫藤〔Wisteria sinensis(Sims)Sweet.〕為豆科紫藤屬落葉木質(zhì)大藤本,是著名的園林環(huán)保觀賞花卉。紫藤集觀賞、醫(yī)療、環(huán)保價(jià)值于一身，具有極高的潛在研究?jī)r(jià)值。隨著紫藤種植面積的增長(zhǎng)，自然生境下紫藤真菌性病害多有發(fā)生。尤以紫藤葉斑病發(fā)生較為普遍，嚴(yán)重影響紫藤的美觀，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)可至全株葉片枯死，對(duì)紫藤可造成毀滅性危害。但是目前國(guó)內(nèi)外對(duì)紫藤葉斑病的研究鮮有報(bào)道。為了有效防控該病害的擴(kuò)展和蔓延，保證觀賞植物及園林產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)

2、發(fā)展，迫切需要對(duì)紫藤葉斑病進(jìn)行全面的調(diào)查和鑒定。本研究在安徽省霍邱縣和池州市采集有典型葉斑病的病葉，進(jìn)行病原菌的分離純化和致病性測(cè)定，對(duì)病原菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)以及分子生物學(xué)鑒定，進(jìn)而研究病原物的生物學(xué)特性和藥劑毒力，以期待為病害的防治奠定理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　1、病原菌的分離與致病性測(cè)定
　　于2014年8月在安徽省霍邱縣和池州市采集有典型葉斑病的病葉，按常規(guī)的組織分離法進(jìn)行分離。得到2株相同的病菌，將兩株菌分別編號(hào)為

3、ZT-1和ZT-2，選取菌株ZT-1進(jìn)行致病性測(cè)定，結(jié)果表明無(wú)論是菌絲塊接種還是孢子懸浮液接種葉片（對(duì)葉片造成傷口前提下）,均可以產(chǎn)生典型癥狀，并可以再分離得到與之相同的菌株,由此可知ZT-1菌株為該病害的病原菌。
　　2、病原菌的鑒定
　　以對(duì)病原菌產(chǎn)孢表型與孢子及菌落形態(tài)的觀察為基礎(chǔ)，對(duì)ZT-1菌株的3個(gè)基因位點(diǎn)序列ITS與gpd和TEF進(jìn)行分析，經(jīng)PCR擴(kuò)增并測(cè)序并在Genbank中Blast后，利用DNAMAN軟件構(gòu)

4、建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。結(jié)果顯示與ZT-1同源性最高的種中有且僅有Alternaria alternata在三個(gè)系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)中同時(shí)出現(xiàn)。根據(jù)形態(tài)學(xué)的觀察結(jié)果：在PCA濾紙上，25℃，12h光照和12h黑暗交替條件下，培養(yǎng)5d，產(chǎn)孢表型呈矮樹(shù)狀，在分生孢子的側(cè)面和基部產(chǎn)生1-5個(gè)孢子的孢子鏈；分生孢子倒棒狀、倒梨形、卵形、廣橢圓形，孢身22-51×8-13μm，具有1-5個(gè)橫膈膜和0-3個(gè)縱、斜隔膜。與Alternaria alternata小孢子種

5、形態(tài)一致。由此可知引起該病害的病原菌為鏈格孢菌Alternariaal ternata（Fr.:Fr.）Keissler，將該病害定名為紫藤葉斑病。
　　3、病原菌的生物學(xué)特性
　　病原菌ZT-1菌絲在10-35℃溫度范圍內(nèi)均能生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為28℃，致死溫度為55℃，10min。菌絲在pH4-10的條件下均可生長(zhǎng)，菌絲生長(zhǎng)的最適pH為6。光照利用病原菌菌絲生長(zhǎng)，在無(wú)碳或氮源條件下均可以生長(zhǎng)，但是在以葡萄糖和淀粉為碳源，

6、以蛋白棟和牛肉膏為氮源時(shí)生長(zhǎng)最好。其中氨態(tài)鹽對(duì)菌絲生長(zhǎng)有抑制作用。
　　分生孢子在10-35℃溫度范圍內(nèi)均能夠萌發(fā)。在5-29℃隨著溫度的升高，孢子萌發(fā)率逐漸增加，最適萌發(fā)溫度為29℃，致死溫度為55℃，10min。在pH3-10范圍內(nèi)均可以萌發(fā)，最適pH為6.2。光照對(duì)孢子萌發(fā)影響差異不顯著，最適碳源為蔗糖、麥芽糖、果糖和葡萄糖。
　　4、殺菌劑對(duì)病原菌的毒力作用
　　供試的10種殺菌劑對(duì)病原菌菌落的生長(zhǎng)都有一定的抑